红细胞裂解后固定，抗体培育后图细胞类别分析

huanghyes

我用红细胞裂解液裂解了3遍，应该基本裂解好了。然后固定打孔孵育抗体，最终上机，能帮忙看一下我门里的可能是什么细胞吗？

一成天

我曾经多次碰到楼主给的这两幅图的情况，不过我是在做HLA-B27检测（HLA-B27/CD3）
溶血洗涤后上机，会发现和楼主一样的这样两群低SSC的细胞，
根据CD3表达情况判断，这两群实际均是淋巴细胞。
不知道楼主用的是自配的PBS，还是买的。

niwanmao

不知道您这群R1的表达情况如何？我个人认为可以是淋巴细胞群，R1的左边那群应该是红细胞

huanghyes

niwanmao 发表于 2011-11-11 10:48

                               
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不知道您这群R1的表达情况如何？我个人认为可以是淋巴细胞群，R1的左边那群应该是红细胞 ...

我没有看表达情况，我只看了核内我目的蛋白的表达情况

niwanmao

huanghyes 发表于 2011-11-11 11:06

                               
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我没有看表达情况，我只看了核内我目的蛋白的表达情况

你是准备测哪群细胞的目的蛋白表达呢？淋巴细胞？
如果测淋巴细胞，建议加个CD5，可以避免红细胞、碎片和单核细胞的干扰；

huanghyes

我想测淋巴细胞核内目的蛋白变化水平，还是分离PBMC比较好是吧？裂解红细胞影响还是会较为明显的？

niwanmao

huanghyes 发表于 2011-11-11 12:12

                               
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我想测淋巴细胞核内目的蛋白变化水平，还是分离PBMC比较好是吧？裂解红细胞影响还是会较为明显的？ ...

都差不多。提PBMC步骤比较繁琐，裂红快。分群两种方法都差不多，只是提PBMC背景可能会干净些。

huanghyes

一成天 发表于 2011-11-11 15:21

                               
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我曾经多次碰到楼主给的这两幅图的情况，不过我是在做HLA-B27检测（HLA-B27/CD3）
溶血洗涤后上机，会发现 ...

谢谢。呵呵，裂解液和PBS都是自己配的