小鼠全血裂解散点图求解

hussarchen · 发表于 2011-11-29 15:50:16

本帖最后由 hussarchen 于 2011-11-30 09:23 编辑

小鼠全血EDTA抗凝后用Immuno Probe裂解液裂解后上机的散点图，想请教一下这里门A~F各堆细胞是什么东西，我这样画门对不对？
图A和B是同一张图，一张我画了门，一张没画。
图C和D是同一张图，只是把FSC的电压调高了，在A区左侧多了一堆细胞，那又是什么？
图A

Gate A B C D E F
Freq. 56.00% 4.64% 19.50% 2.13% 2.62% 2.85%

图B

图C

Gate A' B' C' D' E' F' 哪来的？
Freq. 52.40% 4.66 15.4 1.95 3.42 3.26 5.75

图D

niwanmao · 发表于 2011-11-29 15:50:17

hussarchen 发表于 2011-12-1 09:01

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全血裂解的图跟我这个一样不，这应该属于基础性的问题，不过我只有一本流式的书，也没有说清楚，有什么经典 ...

一般经过这种含固定成份的裂解液裂解之后，都会出现FSC-SSC的偏移。正常的。
象你图片中所示，E为红细胞或碎片；A、F均为淋巴细胞；B为单核细胞；C、D为粒细胞。

hussarchen · 发表于 2011-12-1 09:01:27

全血裂解的图跟我这个一样不，这应该属于基础性的问题，不过我只有一本流式的书，也没有说清楚，有什么经典书籍推荐一下吗？

chujindong · 发表于 2011-12-5 12:34:28

hussarchen 发表于 2011-12-1 09:01

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全血裂解的图跟我这个一样不，这应该属于基础性的问题，不过我只有一本流式的书，也没有说清楚，有什么经典 ...

没有什么书能把这个讲的很细，中国的这些书基本就是抄来抄去，你找不到的，另外，这个问题也没有什么可讲的。一般全血裂解后就是三群细胞，每次做的时候细胞群的位置也不是固定的，这是你每次实验操作以及每次上机的情况都不一样导致的。在获取细胞的时候你就应该能看到三群细胞的大概位置了，这时候圈上就行了。SSC电压低了些，淋巴细胞群都要接触水平轴了。

renping_jsnj · 发表于 2012-8-30 15:29:46

不同的种属，不同的品系和不同的裂解液做出来的图都是有差别的，感觉只要主要的群能分出来就好。传一个我同事做的不同品系小鼠裂解出来的对比图：

renping_jsnj · 发表于 2012-8-30 16:03:37

说到裂红，就再分享一个近期的方法上的改进。
最近全血的实验做的很多，裂红的通量受到很大限制，超过30个就会做的比较痛苦。后来摸索了在96孔板里裂红的方法，可以做到2块板子。
用的裂解液是自配的 NH4Cl裂解液，配方与本版其他帖中说的一样：NH4Cl 8.3g，KHCO3 1g，EDTA Na2 0.037g，至1L。裂红时，在96孔板中，100ul全血加200ul裂解液，RT5min；离心重复一次；PBS清洗。裂的效果挺好，关键是通量上去了。
希望能对其他受通量困扰的战友有所帮助。

niwanmao · 发表于 2012-8-30 16:29:36

renping_jsnj 发表于 2012-08-30 16:03:37

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说到裂红，就再分享一个近期的方法上的改进。
最近全血的实验做的很多，裂红的通量受到很大限制，超过30个

我们网站上放的配方是碳酸氢钠，没想到你用碳酸氢钾也行啊

renping_jsnj · 发表于 2012-8-30 16:35:13

niwanmao 发表于 2012-8-30 16:29

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我们网站上放的配方是碳酸氢钠，没想到你用碳酸氢钾也行啊

难道是我抄站里的配方抄错了，不过我确实用了好多次KHCO3了。

niwanmao · 发表于 2012-8-30 16:47:48

renping_jsnj 发表于 2012-8-30 16:35

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难道是我抄站里的配方抄错了，不过我确实用了好多次KHCO3了。

http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=206

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