小鼠脾细胞裂解散点图求解

hussarchen

小鼠脾细胞（直接用PBS冲出来的，没有用消化酶），分别用（1）自配ACK液裂解 （2）ImmunoProbe FastLysing裂解
图（1）大致画了A~C三个门，图（2）只剩下A门的细胞，其它的不见了。
请问一下这三个门分别代表哪一类细胞，为什么这个商品化的裂解液可以搞得只剩一群细胞了。
图（1）（2）都是同等硬件参数下测出来的。
图（1）


图（2）

stef1981

用的裂解液不一样，细胞的裂解程度不一样，细胞的形态改变程度不一样，所以FSC-SSC上细胞的大小也不一样
图（1)中的B就是图（2）中的A

niwanmao

stef1981正解。其实商业化试剂中基本上都含有固定剂，由于固定剂的影响，导致细胞形态发生较明显的改变，所以这些细胞会缩到那里去。
而至于只剩下一堆的缘故，我个人的看法是这样的：一方面可能由于细胞FSC发生了改变，导致A群红细胞跑到阈值外了，就基本上取不到了，不信你把FSC的阈值调低试试；另一方面，C群可能是一些受自配裂解液影响而未完全裂掉的细胞，细胞膨胀，所以跑到B群淋巴细胞右侧，而商业化试剂固定之后，这些细胞要么在固定过程中被破坏了，要么FSC发生了缩小并到B群里面去了。（注：以上的A、B、C均指图1中的）

hussarchen

niwanmao 发表于 2011-11-29 18:57

                               
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stef1981正解。其实商业化试剂中基本上都含有固定剂，由于固定剂的影响，导致细胞形态发生较明显的改变，所 ...

谢谢管理员跟版主。
看来固定剂的影响挺大的啵，看过有人说收细胞后短时间上机可以不固定，时间长的话可以先固定再上机，给我一种错觉是固定不固定似乎对结果影响不大。现在看来对前/侧散点图影响还是挺明显的。那对荧光影响明显不？
检测细胞表面标记，常规的来说，是否即使上机方便收了细胞马上就可以上机了，你们也会习惯性地去固定一下，以便保持实验条件一致， 不会说今天有空可以马上上机就不固定了，下次没空就先固定过两天再上？

另外，我这边用的是Beckman EPICS XL这台老人家，怎么我一直没找到调阈值的选项。

niwanmao

hussarchen 发表于 2011-11-30 08:56

                               
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谢谢管理员跟版主。
看来固定剂的影响挺大的啵，看过有人说收细胞后短时间上机可以不固定，时间长的话可 ...

先孵育，后固定，一般来说影响不大。
固定两天肯定不行。

hussarchen

niwanmao 发表于 2011-11-30 10:21

                               
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先孵育，后固定，一般来说影响不大。
固定两天肯定不行。

先问一下，有人说固定后一周之内上机都没有问题。
是指的固定短时间（比方说半小时），再换回到PBS中然后就可以多放几天吗？
还是说这个“没有问题”指的是仅仅能测，但图像已经会发生比较明显变化了。