Annexin V-PI法检测凋亡

jingweis530 · 发表于 2011-12-7 18:50:39

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请问老师在做Annexin V-PI法检测凋亡时，用本身的细胞（不加任何试剂）做空白对照，调好仪器，为什么上测定管时会整团细胞向右移动？不论Annexin V FITC或PE，都会出现这种情况，PE更加厉害。而且还会视不同的细胞，有些细胞移动多点，有些细胞移动少点，请老师指教。（图是word文档，但发不上来）

niwanmao · 发表于 2011-12-7 20:26:49

本来就不应该用空白对照。
AV-PI法时，AV-PI-的细胞始终都存在，不知道你们还做空白对照的原因是什么？

jingweis530 · 发表于 2011-12-8 08:47:26

做空白对照管是用来调仪器的啊，相当于同型对照。说明书上是要求一管什么都不加，一管只加AV，一管加PI，调好仪器后再上机测AV-PI管。

stef1981 · 发表于 2011-12-8 09:03:08

jingweis530 发表于 2011-12-8 08:47

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做空白对照管是用来调仪器的啊，相当于同型对照。说明书上是要求一管什么都不加，一管只加AV，一管加PI，调 ...

说明书上是这样说的，但是做空白对照和单标的荧光补偿没用，双标的都会向右上偏移，我们都是直接上双标的来调机

jingweis530 · 发表于 2011-12-8 09:16:23

是不是AV-PI法才会出现这种情况？还是凡是双标就会出项这种情况？我们做其他的表型很少出现这种情况的。当做AV-PI法时阴阳表达分得不是很明显时，怎么划十字线？
另外怎么在正确的版块上提问，找遍整个网页好像都没找着。

niwanmao · 发表于 2011-12-8 09:22:00

jingweis530 发表于 2011-12-8 09:16

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是不是AV-PI法才会出现这种情况？还是凡是双标就会出项这种情况？我们做其他的表型很少出现这种情况的。当 ...

应该说大部分实验用空白对照来调marker的话都会出现偏移现象，这是因为空白对照中没有背景荧光，所以为什么实验中都会提到用同型对照，而不是空白对照。

提问需要选择正确的版块，版块列表都在首页的“我要提问”那里列出来了，也可以在http://www.flowcyto.cn/forum.php?gid=37选择一个子版块提问。

jingweis530 · 发表于 2011-12-8 09:46:27

但我还是不能把我的图贴上去啊

niwanmao · 发表于 2011-12-8 10:38:42

jingweis530 发表于 2011-12-8 09:46

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但我还是不能把我的图贴上去啊

回复的时候选择文本框右上方的“高级模式”，那里面有个上传附件的按钮。

haven_t · 发表于 2011-12-8 12:37:48

个人认为空白是必须的，PI与AV并非抗体，所以没有同型对照的说法，另外假设有极端的情况100%细胞都是双阳性的话没有参照的话怎么办呢？仅仅凭借经验用荧光强度来判断心里会不踏实。

jingweis530 · 发表于 2011-12-8 12:59:02

同意，尤其是阴阳分不开的时候。还有做AV-PI法时，AV要调很高的补偿，不知同道们有否这样的情况?

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[凋亡检测] Annexin V-PI法检测凋亡

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