求助胞内抗原检测方法

可可爸

有这样一个问题向大家请教：
我想检测的抗原分子在细胞膜表面和胞内都有表达，如何用流式的方法直接检测胞内抗原而避免胞膜抗原的干扰呢？
我试的一个方法是用的BC的一个试剂盒，I液固定，II液透膜，本以为I液能封闭膜表面抗原结合位点，实验发现效果不佳，不知道大家有没有好的建议？
谢谢！

niwanmao

可可爸 发表于 2011-12-15 21:06

                               
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如果用特异的非荧光抗体封闭特异位点，这样代价是不是太高了呢？不知道有没有一种抗人的抗体，能把所有位点 ...

没有封闭所有表面位点的抗体。

以前由于很多抗体是多克隆的，可能会采用人血清来封闭一些非特异结合的位点，而对于特异性的位点，还是没有办法封闭的。
即使象您所说的那样，存在封闭所有位点的抗体，你觉得代价会比上述方法便宜吗？其实现在不带荧光的抗体非常便宜，可能几百块就可以。

niwanmao

象这类情况，我们在临床上做的时候，大部分都是在胞膜不表达的情况下，继续做胞内。

如果在胞膜有表达的时候，我的建议就是：
1、如果该抗原是跨膜分子（例如CD3之类），可以买一个针对其胞内位点特异性结合的抗体；
2、如果该抗原不是跨膜分子，建议另外买一个没有荧光标记的（或生物素标记）的抗体，先进行表面标记，把表面位点充分结合了，然后再进行胞内标记，这时，就可以尽可能减小胞膜位点的干扰。

仅供参考，欢迎其它有相关经验的朋友一起交流。

可可爸

如果用特异的非荧光抗体封闭特异位点，这样代价是不是太高了呢？不知道有没有一种抗人的抗体，能把所有位点都封闭了，就是所谓的“封闭抗体”呢？

可可爸

真是非常感谢你的建议，当初还真没有想到用不标记的抗体来封闭。
谢谢罗！

niwanmao

可可爸 发表于 2011-12-16 22:29

                               
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真是非常感谢你的建议，当初还真没有想到用不标记的抗体来封闭。
谢谢罗！ ...

最好能够把您检测的目标说一下，这样可以更好的决定策略，如果该抗体在胞膜上有胞内结合位点，最好找针对这种位点的抗体。如果没有，或者是可溶性的抗原，那是只能暂时采用上述方法。

可可爸

我们要测的是CD36分子，不知道有没有这样的抗体，我查的好像就一种抗体。

niwanmao

可可爸 发表于 2011-12-19 22:30

                               
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我们要测的是CD36分子，不知道有没有这样的抗体，我查的好像就一种抗体。

可爸，CD36似乎在胞内没有什么特异的结合位点，只有N端和C端：http://en.wikipedia.org/wiki/CD36

我在平时免疫分型也做CD36的，这个抗原表达很广：单核细胞、红细胞等都表达，但我觉得CD36应该在胞内不表达吧。

可可爸

有研究表明细胞内是有CD36的，所以我想用流式的方法来检测一下。

niwanmao

可可爸 发表于 2011-12-20 19:36

                               
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有研究表明细胞内是有CD36的，所以我想用流式的方法来检测一下。

能否提供一下文献出处？我查了下pubmed，似乎没找到。