当BD Cycletest™ Plus遇到raji细胞

niwanmao

以前使用过很多次BD Cycletest™ Plus，不管是用于临床标本还是科研细胞株，效果都非常好，染色速度快、周期区分又明显。然而最近一次实验让我纳闷了。一位研究生，按照说明书同样的步骤处理RAJI细胞（一种淋巴瘤细胞株），两次均出现大量碎片，而完整的细胞却很少（见图），这样，就会造成凋亡峰假性增高。


仔细询问标本处理情况，没有一点问题，完全按照说明书的步骤，而且收集细胞的时候，细胞也是很多的。相同的标本，做AV-PI，状态很好，凋亡很少，坏死也很少（见下图）


于是，我就让研究生每做一步就在显微镜下观察一下细胞形态，看看究竟是哪一步出现细胞破碎的情况。观察下来，发现居然是加入A液组分之后，细胞立即发生破碎。据查看成分，A液应该主要由胰蛋白酶组成，难道RAJI细胞对这个胰蛋白酶这么敏感？怎么其它细胞都没看到过这个情况。不知道大家是否碰到过类似情况？

不管什么原因，看来是没办法用这个kit来做周期了，只能建议研究生采用普通的自配PI工作液做周期检测了。

stef1981

胰蛋白酶似乎影响不大，以前做过，加与不加变化不大，现在都不加
碎片多的原因可能是乙醇固定的时候吹打得太厉害，对细胞损伤太大

niwanmao

stef1981 发表于 2011-12-16 11:14

                               
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胰蛋白酶似乎影响不大，以前做过，加与不加变化不大，现在都不加
碎片多的原因可能是乙醇固定的时候吹打得 ...

这个kit的优点就是细胞不需要经过固定，收了就可以直接做。所以细胞形态保存的更好。因此，碎片多跟固定无关，因为每一步做完我都让他查看过镜下细胞形态，加kit中的buffer时都好的，就是A液加入之后，立马细胞碎了。

774055480

niwanmao 发表于 2011-12-16 11:37
这个kit的优点就是细胞不需要经过固定，收了就可以直接做。所以细胞形态保存的更好。因此，碎片多跟固定 ...

我想请问一下是你之前用的BD Cycletest™ Plus DNA Kit这个试剂盒，有没有用solution buffer 处理细胞之后，冻存一点时间再接下来染色的？他的说明书上说是可以这样做的，但是说的不是很清楚，原文是这样说的
PBMCs are now ready for immediate staining and flow cytometric analysis. Cells can also be frozen for later testing. Freeze samples according to standard laboratory procedures.请问您有没有试过冻存处理？冻存条件是什么？谢谢

niwanmao

774055480 发表于 2017-3-3 09:23
我想请问一下是你之前用的BD Cycletest™ Plus DNA Kit这个试剂盒，有没有用solution buffer 处理细胞之 ...

我没冻存过，但从这段文字看，就是普通的冻存操作，不是加buffer后的冻存。

774055480

niwanmao 发表于 2017-3-3 19:38
我没冻存过，但从这段文字看，就是普通的冻存操作，不是加buffer后的冻存。 ...

谢谢倪老师，可怜的是，我用这个试剂盒的时候，把消化成单细胞的肿瘤组织细胞加入A液之后，也出现了大量的碎片，镜下观察很明显，我还怀疑是试剂盒快过期的缘故呢，但是一起作为对照的脾脏细胞却完全正常，真是奇怪呀。

niwanmao

774055480 发表于 2017-3-4 11:09
谢谢倪老师，可怜的是，我用这个试剂盒的时候，把消化成单细胞的肿瘤组织细胞加入A液之后，也出现了大量 ...

可能是不同种类细胞对A液的耐受程度不同吧，其它原因想不出来了