大家看看我的Annexin V-PE和7-AAD双染检测凋亡操作步骤有何不

PompyJohn

如题，我的操作步骤如下：
1. 用未染色的未加药的细胞上样，在FSC-SSC点图中找到细胞，设门。
2. 在FL2-FL3点图中分析上步设门的细胞，划分十字门，调节FL2和FL3的电压吗，将这群细胞处于左下象限。
3. 上样加药处理的确定有凋亡的细胞（Annexin V-PE单染），调节补偿，使细胞处于左下和右下象限。
4. 上样加药处理的确定有凋亡的细胞（7-AAD单染），调节补偿，使细胞处于左下和左上象限。
5. 上述步骤完成后，上样双染的待检测细胞。
通过以上步骤，出现下列问题：
1. 上样加药处理的确定有凋亡的细胞（Annexin V-PE单染），调节补偿时，随着补偿增大，看到除了左下和右下象限有数据外，其他象限都占0%，但是这时在右下象限却看不到细胞点了
2. 上样加药处理的确定有凋亡的细胞（7-AAD单染），未调补偿时，右下象限竟然也出现了数据，大约占3%左右，补偿调到35%左右后，除了左下和左上象限外，其他象限数据为0%

请各位就以上步骤和出现的问题，发表观点，指点一二，谢谢了

niwanmao

步骤没有问题，补偿调节的概念不正确。正确和错误的补偿示意图请参见：http://flowcyto.cn/forum.php?mod=viewthread&tid=231

bluefishcyl

有详细说的么？