请大家看看我的图，帮忙解释一下

PompyJohn

我做AV-PE和7-AAD双染检测凋亡，做了好多次了，可是每次都出现一个问题，就是不管上样未染色的还是单染的样品，细胞总能分成两群，一群占90%多，另一群占10%左右，这到底是为什么？哪位能解释下啊
上图中PE-1为AV-PE单染，AD为7-AAD单染

niwanmao

PompyJohn 发表于 2011-12-28 17:09

                               
登录/注册后可看大图

在FL1/FL2图上调了补偿，会对FL2/FL3图有影响吗？

调节之后，可以把FL1漏到FL2的荧光减掉，于是FL2的荧光会比原来的低，图形会更好看。

niwanmao

这是有点怪的，会不会你的细胞状态的问题。
建议你上一张FSC/SSC点图，下次上机前先在显微镜下观察细胞形态。

PompyJohn

niwanmao 发表于 2011-12-28 11:02

                               
登录/注册后可看大图

这是有点怪的，会不会你的细胞状态的问题。
建议你上一张FSC/SSC点图，下次上机前先在显微镜下观察细胞形态 ...

倪老师，我每次上机前都在显微镜下观察了的，细胞形态都良好，这个细胞是稳转EGFP载体的，会不会因为这个呢？请看FSC-SSC图

niwanmao

PompyJohn 发表于 2011-12-28 11:09

                               
登录/注册后可看大图

倪老师，我每次上机前都在显微镜下观察了的，细胞形态都良好，这个细胞是稳转EGFP载体的，会不会因为这个 ...

建议：
1、FSC/SSC图上把左边这群碎片排除掉，把门设在右边这群正常的细胞。
2、EGFP应该是发荧光的，可能会漏到FL2中，所以造成你的FL2偏高，建议调节一下补偿。
3、FL2/FL3之间也存在补偿，需要调节一下。

PompyJohn

niwanmao 发表于 2011-12-28 11:39

                               
登录/注册后可看大图

建议：
1、FSC/SSC图上把左边这群碎片排除掉，把门设在右边这群正常的细胞。
2、EGFP应该是发荧光的，可 ...

首先谢谢您的建议，我就您的建议提几个问题：
1. 在FSC/SSC图上，我设门时只选择了右边的正常细胞群，可是还出现这样的情况
2. EGFP所发荧光是用FL1接收的，我检测时用的是FL2/FL3，那么调EGFP漏到FL2中的补偿该怎么调？
3. 上未染色的样品时，我都将补偿调为0了，也出现这个样子，如果调了补偿，那么FL2/FL3中较少的那群细胞会跑到右下象限中，还是不能将其调走，这个怎么办呢？

niwanmao

PompyJohn 发表于 2011-12-28 11:45

                               
登录/注册后可看大图

首先谢谢您的建议，我就您的建议提几个问题：
1. 在FSC/SSC图上，我设门时只选择了右边的正常细胞群，可 ...

1、门还是要这样设，可以尽可能排除碎片干扰。
2、你可以用一管没标记AV/7-AAD的细胞上去，画一个FL1/FL2的散点图，调节FL2-FL1的补偿，补偿的调节请参见：关于补偿调节的若干问题讨论
http://www.flowcyto.cn/forum.php?mod=viewthread&tid=231
3、调节好补偿之后，FL2的那种乱七八糟的荧光可能会消失或减少。

PompyJohn

niwanmao 发表于 2011-12-28 11:52

                               
登录/注册后可看大图

1、门还是要这样设，可以尽可能排除碎片干扰。
2、你可以用一管没标记AV/7-AAD的细胞上去，画一个FL1/FL2 ...

多谢，我下次就按您说的试试

stef1981

FL1/FL2调补偿，把绿色荧光对红色荧光的影响减掉

PompyJohn

stef1981 发表于 2011-12-28 16:58

                               
登录/注册后可看大图

FL1/FL2调补偿，把绿色荧光对红色荧光的影响减掉

在FL1/FL2图上调了补偿，会对FL2/FL3图有影响吗？