Treg检测后分析

liuxin · 发表于 2012-2-8 22:28:12

[小老鼠的血，做Foxp3固定破膜后的细胞群只有两群吗？我做的第一次好像就一群（除了碎片）。第二次两群，是单核细胞的没有了吗？正常不破膜的血不应该是三群吗？

第一次

第二次

jingweis530 · 发表于 2012-2-9 08:28:43

小鼠外周血破膜前后正常情况下都是三群细胞，而且破膜前后FSC∕SSC图的位置变化不大。不知道上面左右两张图是不同标本的图，还是破膜前后的图？有时外周血异常，某群细胞特别少的情况下，就会出现两群这种情况。

叶绿素 · 发表于 2012-2-9 12:33:30

哪位老师给标注一下啊，看看各群是什么？

叶绿素 · 发表于 2012-2-9 12:34:43

我帮别人做过TREG，有小鼠的外周血的、肺灌洗液的，不过好像不是这样的图，可能和我调的也有关系，，

liuxin · 发表于 2012-2-9 12:38:08

本帖最后由 liuxin 于 2012-2-9 12:40 编辑

jingweis530 发表于 2012-2-9 08:28

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小鼠外周血破膜前后正常情况下都是三群细胞，而且破膜前后FSC∕SSC图的位置变化不大。不知道上面左右两张图 ...

前面的是我第一次做预实验的图，第二张是后来做的。两张图的标本都是小老鼠的血破膜后的。您说的位置变化不大是指调好FS、SS 后的图吗？（我还真没做过破膜前的，以前做的血都是提淋巴细胞后再做的）破膜前后的FS/SS相差挺大的啊。另外大家有用Log做FS/SS的坐标的吗？

liuxin · 发表于 2012-2-9 12:41:50

本帖最后由 liuxin 于 2012-2-9 12:43 编辑

叶绿素发表于 2012-2-9 12:34

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我帮别人做过TREG，有小鼠的外周血的、肺灌洗液的，不过好像不是这样的图，可能和我调的也有关系，， ...

那您做的FS、SS 图是几群细胞呢？要是方便的话您能发一张图吗？（注：我发得那个图是SS/FS的，不是FS/SS。）

niwanmao · 发表于 2012-2-9 13:19:58

liuxin 发表于 2012-2-9 12:41

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那您做的FS、SS 图是几群细胞呢？要是方便的话您能发一张图吗？（注：我发得那个图是SS/FS的，不是FS/SS ...

刚才咋一看还真的以为横坐标FSC纵坐标SSC，还以为粒细胞分成两堆。现在仔细看了下，才发现纵坐标是FSC，那么这堆应该都是淋巴（除了左下角那堆碎片/红细胞外）。单核细胞至少从FSC－SSC图上看不出来。

我认为，如果你要确定淋巴细胞，建议不要单纯用物理参数，因为很容易混进单核、红细胞等，还是需要加上CD3等标记。

破核膜之后，FSC－SSC是会发生改变的，这是正常现象，不要管它。

niwanmao · 发表于 2012-2-9 13:26:01

叶绿素发表于 2012-2-9 12:33

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哪位老师给标注一下啊，看看各群是什么？

除了左下角是碎片和红细胞，其它都是淋巴细胞，可能有少量单核细胞会混在其中，但最终还是需要用标记进行确定。
PS：刚才看到你已通过实名认证，故加了50颗流星，现在你已有83颗流星了，加迟了，抱歉。

chujindong · 发表于 2012-2-9 13:34:19

不同的标本细胞分群是有差别的。我感觉一般单核细胞可能会比较少，但是淋巴细胞群都是存在的。建议你发图时还是颠倒一下坐标吧，感觉文献里、论坛里没有见过这样的，容易误解。

liuxin · 发表于 2012-2-9 15:15:08

本帖最后由 liuxin 于 2012-2-9 15:26 编辑

niwanmao 发表于 2012-2-9 13:19

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刚才咋一看还真的以为横坐标FSC纵坐标SSC，还以为粒细胞分成两堆。现在仔细看了下，才发现纵坐标是FSC， ...

这是新的图，前面的是碎片，中间的是淋巴细胞，后面的是粒细胞？对吗？还是说出了前面的碎片其余的根本就一个细胞群。在CD4标记的时候，最右上角的细胞群也有点如图

对比一下。前面的图是后面的图但是只显示CD4阳性结果（没有做CD3的抗体）

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