测周期时细胞固定问题

feloys · 发表于 2012-2-20 16:53:33

本人是新手，最近做周期，细胞70%乙醇固定过夜后，离心，离心管的壁上还能清晰可见细胞，但PBS再洗涤离心后发现细胞没有了，用的转速是2000转 6min，4°C，有时在第一步离心时就发现没有细胞离下来，不知怎么办，请高手指点下，谢谢啦……

niwanmao · 发表于 2012-2-20 17:02:43

看不见不代表没有，可能细胞不多而已。上机取过吗？

feloys · 发表于 2012-2-20 17:12:46

niwanmao 发表于 2012-2-20 17:02

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看不见不代表没有，可能细胞不多而已。上机取过吗？

取过，不懂为什么第一次离心时还能看到很多细胞，第二次离心就没有了，有几次看分析结果细胞数只有3000,4000，会不会太少

niwanmao · 发表于 2012-2-20 17:15:15

feloys 发表于 2012-2-20 17:12

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取过，不懂为什么第一次离心时还能看到很多细胞，第二次离心就没有了，有几次看分析结果细胞数只有3000,4 ...

是的，一般周期分析的目标细胞最好取20000－30000个。这样曲线拟合的准确性更高。有可能你看到的管壁白色物质是死细胞吧。

stef1981 · 发表于 2012-2-20 17:18:51

可能是离心完后，从离心机里取出来时不小心又重悬了，倒的时候全部倒出去了

feloys · 发表于 2012-2-20 17:21:26

niwanmao 发表于 2012-2-20 17:15

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是的，一般周期分析的目标细胞最好取20000－30000个。这样曲线拟合的准确性更高。有可能你看到的管壁白色 ...

固定完的细胞不都是死细胞吗

feloys · 发表于 2012-2-20 17:23:11

stef1981 发表于 2012-2-20 17:18

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可能是离心完后，从离心机里取出来时不小心又重悬了，倒的时候全部倒出去了 ...

这个我确定没有，离完心，轻轻拿出来看，管壁上看不见细胞

niwanmao · 发表于 2012-2-20 19:32:50

feloys 发表于 2012-2-20 17:21

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固定完的细胞不都是死细胞吗

那倒也不是肯定都是死细胞，只是固定之后的死细胞或碎片往往会在离心之后存在于上清中，而被去掉。如果死细胞或细胞碎片较多，请注意固定时候的乙醇浓度、振荡手法轻重试试。仅供参考。

feloys · 发表于 2012-2-20 19:55:17

niwanmao 发表于 2012-2-20 19:32

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那倒也不是肯定都是死细胞，只是固定之后的死细胞或碎片往往会在离心之后存在于上清中，而被去掉。如果死 ...

谢谢啦……

vetzcm · 发表于 2012-2-22 17:05:48

乙醇固定细胞后，细胞变得很轻，在固定液中倾向于漂浮，离心前往固定液中加点PBS再离心效果会好些

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