流式分选时的抗体不会影响细胞活性？

niwanmao

机器比较低级，没配有分选装置，所以一直没接触分选这方面的内容。
所以，在此向流式分选的高手请教一下，流式分选时要标记抗体，这些抗体不会影响细胞活性吗？还是分选之后还需要经过什么液体洗涤，把这些抗体洗脱掉？

gcz5340

像你说的这种情况那肯定有影响的，但一般分选都不会针对CD20、凋亡受体这些分子，一般都是常见的标记分子分选特定的细胞亚群，所以也不用考虑抗体封阻带来的活性影响。
另外就是，分选的操作倒是对细胞的活性影响很大，高压高电荷高速度的刺激，所以一些免疫细胞或原代细胞能用磁珠分的还是应该选用磁珠分选或磁珠流式分选相结合。

stef1981

我们这边大部分都是做出来以后直接提RNA或者蛋白的，继续培养很少。自己没做过分选后的细胞培养

niwanmao

stef1981 发表于 2012-2-28 15:27

                               
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我们这边大部分都是做出来以后直接提RNA或者蛋白的，继续培养很少。自己没做过分选后的细胞培养 ...

那细胞上标记的抗体不洗涤吗？这不会影响他们的结果？

gcz5340

是这样，分选之后，一般也就离心把多余的鞘液PBS洗掉，换正常培养基培养。并没有什么特殊的洗脱液把偶联荧光素的抗体洗脱掉，这其实和磁珠分选一样，磁珠分选后抗体小球也还是连在细胞上的，一般的实验来说并不会影响细胞的活性。
至于偶联的抗体，我们检测过分选后第二天的细胞，还是带有荧光的，可能过个几天就解离下来了，我是这么理解的，欢迎其他的流客们给出更多的解释。

niwanmao

gcz5340 发表于 2012-2-28 16:00

                               
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是这样，分选之后，一般也就离心把多余的鞘液PBS洗掉，换正常培养基培养。并没有什么特殊的洗脱液把偶联荧 ...

“流客”这个词有点意思：）

我在想，临床上都用CD20单抗来治疗B细胞淋巴瘤，杀伤这些细胞，虽然在人体内有其它细胞或因素参与，但是单独培养也不排除会影响其原有的功能吧？
不过或许细胞如果能养活，传个几代就会消失掉吧，但这一代的细胞活性我想应该会受影响的吧？

niwanmao

gcz5340 发表于 2012-2-28 16:48

                               
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像你说的这种情况那肯定有影响的，但一般分选都不会针对CD20、凋亡受体这些分子，一般都是常见的标记分子分 ...

噢，看来流式分选技术还需要继续改进。

niwanmao

gcz5340 发表于 2012-2-28 16:48

                               
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像你说的这种情况那肯定有影响的，但一般分选都不会针对CD20、凋亡受体这些分子，一般都是常见的标记分子分 ...

磁珠分选这玩意儿跟流式分选两者相比有啥优缺点？能否列张对比表给我们这些门外汉看看。

gcz5340

niwanmao 发表于 2012-2-29 10:41

                               
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磁珠分选这玩意儿跟流式分选两者相比有啥优缺点？能否列张对比表给我们这些门外汉看看。 ...

倪老师过谦了啊，等会我去开个新帖啊。

niwanmao

gcz5340 发表于 2012-2-29 11:09

                               
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倪老师过谦了啊，等会我去开个新帖啊。

确实不了解，不懂就问嘛：）

多谢。