有用CD3，CD4，CD25做封闭抗体吗？有的话麻烦分析图上来，急

戈壁滩

最近准备开展封闭抗体的检测，但因没做过这方面的工作，不知如何进行设门，分析，求高手指教

niwanmao

这是不是用在检测不孕不育的？

戈壁滩

niwanmao 发表于 2012-3-2 21:44

                               
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这是不是用在检测不孕不育的？

是检测反复流产的

niwanmao

戈壁滩 发表于 2012-3-3 21:11

                               
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是检测反复流产的

检索了下，发现pubmed上外国人的文章都没有关于流式检测RSA的文章，都是国内的文章。我有点奇怪，这项技术是不是比较过时了？

国内的文章也大部分都是做elisa的，只看到一篇做流式，写的还算详细，你看看是否合适？下面是里面的方法学摘要，写的还比较详细的，全文附件见（https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=OTM5fDAyMmJjOWRmfDE3MzQ4NDEzMDF8MHw%3D 反复自然流产患者经配偶淋巴细胞免疫治疗后外周封闭抗体水平变化.pdf.pdf (121.98 KB, 下载次数: 123)

2012-3-3 21:51 上传

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反复自然流产患者经配偶淋巴细胞免疫治疗后外周封闭抗体水平变化
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）

1. 3 　样本采集　分别采集配偶双方静脉血2 ml ,其中1 ml 肝素抗凝、1 ml 不抗凝。1 小时内分离血清,并灭活补体,待用。
1. 4 　封闭抗体测定　取流式管两支标明“测定管”和“对照管”,在测定管中加入丈夫肝素抗凝血50μl和妻子血清50μl ;对照管中加入丈夫肝素抗凝血50μl 和丈夫本人血清50μl ,每管加入CD4/ CD25/ CD3荧光抗体试剂10μl ,充分混匀,室温暗处孵育30 分钟;取出加入红细胞裂解液1 ml ,混匀,室温避光10分钟;1 500 r/ min ,5 分钟离心沉淀弃上清液,加入500μl PBS 液将沉淀细胞洗涤1 次后,加入500μlPBS 液重悬细胞,上流式细胞仪检测1 ×104 个细胞;应用Cell Quest 软件圈定淋巴细胞门,得出T 淋巴细胞百分率。对照管CD 百分率减测定管CD 百分率即为封闭抗体的封闭效率(CD2BE , %) 。

戈壁滩

这篇文章看过，流程没什么问题，主要是想看一下如何分析的，这几天正和丁克文主联系。谢谢民

niwanmao

戈壁滩 发表于 2012-3-9 23:21

                               
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这篇文章看过，流程没什么问题，主要是想看一下如何分析的，这几天正和丁克文主联系。谢谢民 ...

就是圈淋巴细胞，分析对照管和测定管的CD4、CD3、CD25的表达率，两者相减，就是封闭效率。

戈壁滩

这样减下来就有CD3,CD4,CD25的三个数据，按文献上说，大于百分之一为阳性，如果减的数值有一个大于百分之一，其余二个小于百分之一，或一个小于百分之一，二个大于百分之一，这种情况下如何确定阴阳性？

niwanmao

戈壁滩 发表于 2012-3-14 20:21

                               
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这样减下来就有CD3,CD4,CD25的三个数据，按文献上说，大于百分之一为阳性，如果减的数值有一个大于百分之一 ...

我在想，这封闭抗体为什么只有中文文章，而且发表的杂志都是比较差的，老外为什么不做这项检测？这项检测的意义是否真的有？

建议还是参考一下其它外文文章，可在pubmed上看看那些相关的文章：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubm ... flow%20cytometry%22

在其中找几篇影响因子略高的文章参考一下，例如这篇http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21029245的Th17与RSA的相关性。

haven_t

觉得这个实验设计存在问题，就像抗体量不足的时候首先表现的是整个阳性荧光强度下降，而不是百分含量降低。因为抗体抗原反应应该是均匀的，所以应该是整个群体的荧光强度下降，而不是就那百分之几的细胞被封闭。CD25下降的原因可能因为表达量相对CD3和CD4不高，荧光强度下降造成的影响较大。

evadj86

请教一下老师，文中提到“1 小时内分离血清，并灭活补体”，灭活补体的意义何在？如何灭活补体？谢谢。