单核细胞巨噬细胞的标记问题

liuxin

各位Flower，要是用一种抗体标记血中的单核细胞，巨噬细胞（急性肝衰竭或者肝硬化鼠标本）应该选什么抗体？要是选两种抗体标记血中的单核呢？
标记肝中的巨噬细胞（kupffer细胞）用哪种抗体呢？F480和CD14标记kupffer细胞对吗？
文献看得有点晕啊，怎么单核还有Gr-1的？   望大家给点意见

niwanmao

找到一篇做猪KC细胞的，给你做个参考，如果你做人的标本，需要注意一下，抗体不能订文章中的那些克隆，因为那些针对猪KC的。

下面是文章中的方法学部分摘节，我觉得很奇怪，他们用CD14、CD11b、CD18、CD45来标记KC细胞，但单核细胞也全部都表达这些表达，如何能够保证单核不被混进去？
附件中是全文PDF。 101313KsP.pdf (342 KB, 下载次数: 42)

2012-3-3 10:38 上传

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Primary Porcine Kupffer Cell Phagocytosis

Flow Cytometry
KC were released from culture plates on day 3 using 12 mM lidocaine in PBS at 37°C (26). Cells were blocked with PBS containing 0.5% BSA, 0.02% sodium azide and stained with anti-CD11b (American Type Culture Collection, Manassas, VA, HB-249), anti-CD14 (R&D Systems, Minneapolis, MN), anti-CD18 (Developmental Studies Hybridoma Bank, Iowa City, IA, H52), and anti-CD45 (ABD Serotec, Raleigh, NC) for 1 hr followed by two washes with buffer. Mouse isotypes IgG1k and IgG2b (eBioscience, San Diego, CA)
were used as negative control. Propidium iodide staining was used to exclude dead cells. Goat anti-mouse IgG PE (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA) was used as secondary. All flow cytometry data was collected and analyzed on the Accuri C6 flow cytometer and CFlow software (Accuri, Ann Arbor, MI).

86964109

[niwanmao 发表于 2012-3-3 10:38

                               
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找到一篇做猪KC细胞的，给你做个参考，如果你做人的标本，需要注意一下，抗体不能订文章中的那些克隆，因为 ...

倪老师，我是流式的小白，请教您一个问题，想鉴定一下自脂肪组织中分离的基底细胞中巨噬细胞M1/M2型比例，用N4/80,CD11c，CD206标记后流式检测，文献中讲抗体孵育前用Pharm Lyse，2.4G2（BD）处理，之后还要用7-amino-actinomycin D 孵育处理，那么这些试剂都是必须的吗？我订购抗体之外必须订购这些或类似的试剂吗？因为我看国内好些论文好像都是直接孵育的。另外，还想请教的问题是三种抗体的同型对照是不是严格都需要做呢，可以同一管样本中检测是吗？谢谢您！！ Regulatory mechanisms foradiposetissue M1 and M2 macrophages in diet-induced obe.pdf (338.02 KB, 下载次数: 37)

2013-3-1 16:39 上传

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niwanmao

86964109 发表于 2013-3-1 16:01

                               
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倪老师，我是流式的小白，请教您一个问题，想鉴定一下自脂肪组织中分离的基底细胞中巨噬细胞M1/M2型比例 ...

Pharm Lyse是红细胞裂解液，用来裂解红细胞，如果你分离出来没有红细胞，不裂也是可以的。
7-AAD是用来区分死细胞和活细胞。一般象你这种组织标本，最好标上。
至于其它三个抗体，可以不用同型，最好做FMO对照。

86964109

niwanmao 发表于 2013-3-1 16:41

                               
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Pharm Lyse是红细胞裂解液，用来裂解红细胞，如果你分离出来没有红细胞，不裂也是可以的。
7-AAD是用来区 ...

感谢您的解惑，  我先去试一下

美猫秀秀

倪老师 ，请问您有巨噬细胞流式图吗？我跑脾脏和肾脏 ，分群不太一样。肾脏没有裂红，会不会有影响？

niwanmao

美猫秀秀 发表于 2014-8-18 15:43
倪老师 ，请问您有巨噬细胞流式图吗？我跑脾脏和肾脏 ，分群不太一样。肾脏没有裂红，会不会有影响？ ...

没有裂红和裂红的细胞分群略有不同。

FCMao

文献中巨噬细胞表型 (CD45+ CD11b+ F4/80+),  MHCII的表达可区分M1和M2，MHC IIHigh (M1) and MHCIILow (M2) 。GR1的我也在文献中看到过。你可以多看几篇文献，选择好标记。你可以参考一下这篇文章，希望对你有用。