3色凋亡

bluefishcyl

请问有没有用转EGFP的细胞做过凋亡的童鞋？用Annexin V-PE和7-AAD双染检测凋亡
我需要设置怎样的对照来调节补偿。可以详细说说么？

niwanmao

bluefishcyl 发表于 2012-3-22 12:29

                               
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不转染EGFP的细胞
转染egfp的细胞
不转egfp的细胞，染AV-PE

是的，按正规步骤，我之前那个方案里面看来把“不转染EGFP”这组用来调节电压给漏了
应该是：
1、不转染EGFP，调节电压
2、转染EGFP，调节FL2-FL1
3、不转染EGFP，单染AV-PE，调节FL3-FL2和FL1-FL2；建议调好之后再用一管转染EGFP的细胞单染AV-PE试试。因为转染之后，有了EGFP之后，某些特性可能会跟转染前有所不同。
4、转染或不转染egfp的都可以，单染7－AAD，调节FL2-FL3
5、实验管，可以适当微调补偿。

供参考。

niwanmao

1、用空白细胞调节电压，同时调节FL2-FL1。
2、用ANNEXIN V -PE单染管，调节FL1-FL2和FL3-FL2
3、用7-AAD单染管，调节FL2-FL3。
4、上双染的样本管。

bluefishcyl

空白细胞 怎么调节FL2-FL1，不是只用调电压。是需要用转染egfp的细胞 调FL2-FL1吧！还差一个单染的。

niwanmao

bluefishcyl 发表于 2012-3-22 10:54

                               
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空白细胞 怎么调节FL2-FL1，不是只用调电压。是需要用转染egfp的细胞 调FL2-FL1吧！还差一个单染的。 ...

你这里的空白细胞就是指转染EGFP、而未加药处理的细胞啊。没错啊。

bluefishcyl

不转染EGFP的细胞
转染egfp的细胞
不转egfp的细胞，染AV-PE
不转egfp的细胞，染7aad
然后是双染的实验组
是这样的么？

bluefishcyl

关于4、转染或不转染egfp的都可以，单染7－AAD
为什么转染或不转染egfp都可以，单染7aad，都可以调节FL2-FL3的补偿？

niwanmao

bluefishcyl 发表于 2012-3-22 19:57

                               
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关于4、转染或不转染egfp的都可以，单染7－AAD
为什么转染或不转染egfp都可以，单染7aad，都可以调节FL2-FL ...

因为EGFP是FL1检测的，7-AAD是FL3检测的，两者之间不需要补偿，所以你用不转染EGFP的细胞和转染EGFP的细胞单染7-AAD都可以。
我建议用转染EGFP的细胞，因为你的实验管是转染EGFP的，所以调节补偿最好用同样性质的。

bluefishcyl

谢谢！第一次做流式，等我做了实验，把图丢上来，再看看。

niwanmao

bluefishcyl 发表于 2012-3-23 08:32

                               
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谢谢！第一次做流式，等我做了实验，把图丢上来，再看看。

好的，非常欢迎有反馈的交流。