请问大家在制备周期细胞样品时，一般用哪种规格的离心管

vetzcm · 发表于 2012-3-26 21:16:36

如题，主要是想向大家学习下，哪种大小（10ml,4ml,1.5ml)的离心管收集细胞做周期实验方便，损失细胞少....
我一直是六孔板养细胞，1.5ml离心管收集处理细胞，台式离心机250g(1840rpm）离心5min,如果按照有些步骤的PBS洗涤次数（固定前洗2次，固定后洗2次，每次用移液枪吸弃上清，上清中会肉眼见到漂浮的部分细胞！！！），到最后的上机数肯定会少很多。虽然减少洗涤次数，可以减少损失，但我觉得那样检测的结果不太可靠 RCS大。

niwanmao · 发表于 2012-3-26 21:32:29

你所说的1.5ml管是不是指eppendorf管？那也可以啊。我们用流式管离心洗涤。
洗涤次数不需要这么多吧，而且离心后去上去小心吸取上清只要小心团块一般丢失率不高的。

vetzcm · 发表于 2012-3-26 21:50:01

niwanmao 发表于 2012-3-26 21:32

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你所说的1.5ml管是不是指eppendorf管？那也可以啊。我们用流式管离心洗涤。
洗涤次数不需要这么多吧，而且 ...

我说的离心管，确实是EP管，不知你们流式管离心洗涤，是从胰酶消化细胞，后收集细胞开始，还是从乙醇固定后开始用啊？

ddn111 · 发表于 2012-3-26 22:00:14

我们这处理细胞都用10ML玻璃离心管，比塑料的要好！塑料的容易带静电，吸咐细胞！

vetzcm · 发表于 2012-3-26 22:05:02

ddn111 发表于 2012-3-26 22:00

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我们这处理细胞都用10ML玻璃离心管，比塑料的要好！塑料的容易带静电，吸咐细胞！ ...

是的，见到有些Protocol上是用玻璃离心管的，我们实验室一直沿用塑料离心管，这个还是挺考验操作的...感谢你的回答啊

niwanmao · 发表于 2012-3-26 22:12:25

vetzcm 发表于 2012-3-26 21:50

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我说的离心管，确实是EP管，不知你们流式管离心洗涤，是从胰酶消化细胞，后收集细胞开始，还是从乙醇固定 ...

我们做悬浮细胞，收集细胞洗涤1——2次。然后就进行固定。

niwanmao · 发表于 2012-3-26 22:15:34

ddn111 发表于 2012-3-26 22:00

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我们这处理细胞都用10ML玻璃离心管，比塑料的要好！塑料的容易带静电，吸咐细胞！ ...

平时细胞多，倒是没有注意这种原理，不过似乎以前物理也学过玻璃也容易带电荷的，应该不是电荷的问题吧。

vetzcm · 发表于 2012-3-26 22:18:54

niwanmao 发表于 2012-3-26 22:12

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我们做悬浮细胞，收集细胞洗涤1——2次。然后就进行固定。

我做贴壁细胞，之前就是PBS洗洗细胞，胰酶消化，PBS收集细胞后，离心，吸掉上清，加入200ulPBS，重悬细胞，加入70%乙醇1ml,我现在感觉自己做周期固定时，没有进行PBS洗涤造成了我上机收集细胞数目虽然是20000，但分析时，总显示只有几千个细胞被分析，估计好多细胞碎片没去除...看来固定前还是洗洗，固定后染色前，最好是不是也要洗洗好些呢？

niwanmao · 发表于 2012-3-26 22:22:26

vetzcm 发表于 2012-3-26 22:18

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我做贴壁细胞，之前就是PBS洗洗细胞，胰酶消化，PBS收集细胞后，离心，吸掉上清，加入200ulPBS，重悬细胞 ...

固定后要洗涤的，可以去除乙醇和一些小碎片

ddn111 · 发表于 2012-3-26 22:24:33

硅化处理过的塑料管子也行，硅化后优点就是不挂液体，减少吸咐！进口的流式管应该也是硅化过的吧！

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[细胞周期] 请问大家在制备周期细胞样品时，一般用哪种规格的离心管