小鼠腹腔液巨噬细胞的问题

zark_00 · 发表于 2012-4-23 09:41:20

请问各位，小鼠腹腔液中巨噬细胞的比例有多少，如用肉汤，PBS之类注射刺激的话，会不会有别的细胞，大概有多少。或者哪篇文献或者资料有讲这个的，麻烦告诉下名称，我好去找找。
我现在做的是半体内法测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬，用CFSE染鸡红细胞，然后往小鼠腹腔注射，然后取腹腔液，做裂解处理后上机，排除掉未裂解掉得鸡红细胞和碎片后，剩下的绝大部分（90%+）的群体我就认为是巨噬细胞（这个基于我从某些论坛上看到的，说小鼠腹腔液中95%都是巨噬细胞），然后FITC直方图上，阳性峰所占比例，即为巨噬细胞的吞噬率。
下午再来上图，正在整理

niwanmao · 发表于 2012-4-23 11:39:52

是不是可以标记一下巨噬细胞标记mac-1试试？

zark_00 · 发表于 2012-4-23 12:39:31

本帖最后由 zark_00 于 2012-4-23 12:48 编辑

恩，正在跟老板申请呢，我觉得也应该要，腹腔液里的细胞我查了下应该叫腹腔渗出细胞，有些说巨噬细胞90%有些说40%+，还有白细胞存在。

niwanmao · 发表于 2012-4-23 20:37:45

zark_00 发表于 2012-4-23 12:39

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恩，正在跟老板申请呢，我觉得也应该要，腹腔液里的细胞我查了下应该叫腹腔渗出细胞，有些说巨噬细胞90%有 ...

我虽然没做过小鼠的，但是做过人的腹水，也就是类似于小鼠的腹腔积液，里面淋巴细胞、粒细胞、单核细胞均有，所以，我建议还是通过MAC-1进行鉴定。

zark_00 · 发表于 2012-4-25 09:48:15

本帖最后由 zark_00 于 2012-4-25 09:53 编辑

问个抗体用量的问题，现在买的BD抗体没有推荐每百万细胞的用量了，昨天做了个简单的NK和成熟T分型，感觉好像不对，最近很忙，进度不允许做滴定...请问下小鼠淋巴细胞NK和成熟T分型中，一般用量是多少ug/百万个，昨天按1ug/百万做的，有空发图，很忙。用的是小鼠脾研磨分离后的细胞。
谢谢

niwanmao · 发表于 2012-4-25 09:56:02

zark_00 发表于 2012-4-25 09:48

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问个抗体用量的问题，现在买的BD抗体没有推荐每百万细胞的用量了，昨天做了个简单的NK和成熟T分型，感觉好 ...

什么抗体？MAC-1吗？把货号和批号放上来看看

zark_00 · 发表于 2012-4-25 10:24:08

做NK和T分型的抗体
CD45 FITC Cat#553080 Lot#87316
CD3 PerCP-Cy5.5 Cat#560527 Lot#26251
CD49b PE Cat#553858 20640

zark_00 · 发表于 2012-4-25 10:24:58

本帖最后由 zark_00 于 2012-4-25 10:39 编辑

发错图了，一会发

niwanmao · 发表于 2012-4-25 10:54:45

zark_00 发表于 2012-4-25 10:24

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做NK和T分型的抗体
CD45 FITC Cat#553080 Lot#87316
CD3 PerCP-Cy5.5 Cat#560527 Lot#26251

分群不是挺好的嘛。

如果说明书里面没有说，按照我平时使用的经验，BD的抗体基本上的用量是针对10⁶次方细胞，除了APC标记的是5μL，其余标记都是20μL。

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