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还是自己配制氯化铵裂解液靠谱

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发表于 2012-5-3 11:21:52 | 显示全部楼层 |阅读模式

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前段时间,由于氯化铵没有了,就订了BD的裂解液,结果那一个月用下来,搞的我焦头烂额,不但CD45-SSC图形改变很大,而且BD自己的CD19 FITC也产生了分群不清的现象,颗粒大的细胞CD19居然荧光明显变强,造成假阳性。

节前,重新开始自己配制氯化铵裂解液,图形终于恢复正常,CD19的分群也正常了。看来还是自己配制的氯化铵裂解液靠谱。

图形对比见二楼。
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 楼主| 发表于 2012-5-3 19:19:10 | 显示全部楼层

自己配制的氯化铵裂解液与BD裂解液对比

以正常标本为例比较两种裂解液效果。
首先看看自己配制的氯化铵裂解液,CD45-SSC设门图细胞分群清楚,选择R3(即淋巴细胞)分析,由于正常情况下淋巴细胞会有少量B淋巴细胞存在,所以会有一小群CD19阳性的细胞,可见CD19阳性和CD19阴性分群清楚。

自己配制的氯化铵裂解液,细胞分群清楚

自己配制的氯化铵裂解液,细胞分群清楚

自己配制的氯化铵裂解液,CD19分群清楚

自己配制的氯化铵裂解液,CD19分群清楚



再看看BD的裂解液,CD45的设门图忘了拍了,分群尚可,但是R1的粒细胞分布形态与上面的完全不同,即中晚幼粒的SSC明显减小,再看下图的淋巴细胞CD19表达,同样都是用BD的CD19 FITC,用了BD的裂解液,T淋巴细胞的CD19荧光增高,且与B淋巴细胞的CD19表达混合在一起,分群不清。之前我们还以为是CD19的批次质量问题,现在看来,应该还是这个BD裂解液的问题。


BD裂解液,CD19荧光增高,且分群不清

BD裂解液,CD19荧光增高,且分群不清


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发表于 2012-5-7 20:30:52 | 显示全部楼层
裂解液对荧光抗体有影响?
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 楼主| 发表于 2012-5-7 21:22:52 | 显示全部楼层

放置时间短的话,影响不大。象BD的裂解液我不知道它里面什么成份,为什么会对CD19造成这么大的影响。
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发表于 2012-5-8 13:39:11 | 显示全部楼层
站长您自己配得氯化铵裂解液,是否就是ACK ,我们也是用的ACK ,按配方自己配,BD的贵...
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 楼主| 发表于 2012-5-8 14:47:39 | 显示全部楼层
zark_00 发表于 2012-5-8 13:39
站长您自己配得氯化铵裂解液,是否就是ACK ,我们也是用的ACK ,按配方自己配,BD的贵... ...

ACK?这个名字倒没听说过。反正就是这个配方,是current protocol in cytometry一书中推荐的:http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=178
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