luxj807 发表于 2012-5-15 12:03
谢谢老师,我在网上找的操作步骤大都是分析,我想找具体的设门步骤.谢谢老师. ...
BD官方的procount试剂盒说明书第9页里面其实讲了，见附件：https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=MTIwM3w0MDkwNjg3MnwxNzM1OTA2NzE2fDB8
主要是画3个图：
– nucleic acid dye vs SSC
– CD45 PerCP vs SSC
– Two displays of nucleic acid dye vs CD34 PE (the second display will be gated on R1 and R2)
第一个图用来排除死细胞，第二个图是参照ISHAGE方案，选择CD45弱阳性、SSC小的细胞群，第三个图是画两个核酸染料/CD34的散点图，分别用来分析干细胞和微球。
下面我帮你简要翻译一下：
1、在核酸染料－SSC散点图上，先画淋巴细胞门R1、有核细胞门R6，有效排除死细胞。
淋巴细胞门R1、有核细胞门R6
2、CD45－SSC散点图上，画R2：CD45弱表达细胞（这是我们需要的干细胞特征）；R4：微球；R7：CD45阳性细胞
R2：CD45弱表达细胞；R4：微球；R7：CD45阳性细胞
3、在核酸染料－CD34散点图上，并把gate设为R1 AND R2，画R3：CD34＋造血干细胞：
R3：CD34＋造血干细胞
这样，R1 AND R2 AND R3就是造血干细胞（#CD34 cells）
4、另外画一个核酸－CD34散点图，把GATE设为R4，画微球的门R5，这样R4 AND R5就是微球（#beads）：
微球
5、最后，按照计算公式计算绝对数：
#CD34 cells和#beads就是上面算出来的CD34＋细胞和微球占总数的百分比
计算公式
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发表于 2012-5-15 11:14:17
发表于 2012-5-15 11:50:05
