附上FCS文件，请大家帮忙指导

FacsAriaIII · 发表于 2012-5-18 18:19:21

实在是初学，所以请高手指点指点，从voltage、laser设置到如何gate，都请指导指导。
标本是小鼠肠道的派氏淋巴结，
1.未染色对照；2.单染FITC；3.单染PE；4.单染APC；5.单染PE-Cy7；7.染FITC和APC；8.染PE/APC/PE-Cy7

多谢啦。

120426 PP NAIVE T.rar (1.9 MB, 下载次数: 63)

niwanmao · 发表于 2012-5-18 18:19:22

看了下。关于补偿和电压的设置，基本到位，但电压略偏小，补偿调节时你可能按照细胞群上边缘进行了调节，这个调法虽然相差不大，但概念上不正确，具体可参考这篇帖子：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=231
我大致点了下最后一个文件的各个细胞群中心位置（蓝色的点），把这些点的位置对齐，就说明调整到位了。具体在实际操作中，可以把阳性细胞群和阴性细胞群分别圈起来，然后查看其MEDIAN数值是否基本一致，调到一致，就说明补偿调整到位。
图片如下（点击图片放大）：

第9个文件的分析结果

niwanmao · 发表于 2012-5-18 21:05:46

要分析T淋巴细胞吗？

FacsAriaIII · 发表于 2012-5-19 15:55:11

多谢倪老师，T,B，TCR都分析的。
补偿的时候也是本着您介绍的概念的。但是因为是先用单染的标本做的，这样是不是做完补偿之后，检测第7、8管的时候还需要再调补偿。
另外就是，第9管和前面单染的标本不是同一个组织，7,8才是，所以会不会这样也有点差别呢
电压小，是指哪个电压小啊？FSC/SSC/其他laser？
多谢！

niwanmao · 发表于 2012-5-19 16:08:39

FacsAriaIII 发表于 2012-5-19 15:55

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多谢倪老师，T,B，TCR都分析的。
补偿的时候也是本着您介绍的概念的。但是因为是先用单染的标本做的，这样 ...

标本不同会略有差异，但问题不大。

电压略小是因为觉得图上有些细胞在地平线下方，如果不是很严格，象您这样的图形也是可以的。

FacsAriaIII · 发表于 2012-5-19 17:30:43

多谢多谢。
以后还要多向您请教。

FacsAriaIII · 发表于 2012-5-23 15:25:08

请教，再帮忙看一下，这个文件有明显的3个群，左边一个是死细胞，那右边两个我该圈哪个呢？细胞是小肠的派氏结。多谢！！

niwanmao · 发表于 2012-5-23 17:30:23

FacsAriaIII 发表于 2012-5-23 15:25

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请教，再帮忙看一下，这个文件有明显的3个群，左边一个是死细胞，那右边两个我该圈哪个呢？细胞是小肠的派 ...

如果有原始数据最好放上来。因为可以看看最右侧这堆的表达如何，有可能是单核，也有可能是淋巴细胞分开来。

FacsAriaIII · 发表于 2012-5-23 18:57:45

谢谢，我传上去了。单染的细胞因为这次没有用同一个组织，所以就没往上传。

niwanmao · 发表于 2012-5-23 20:45:08

FacsAriaIII 发表于 2012-5-23 18:57

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谢谢，我传上去了。单染的细胞因为这次没有用同一个组织，所以就没往上传。 ...

FITC、PE、APC、PE-CY7分别都是什么抗体？

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