双染测凋亡

mayi009 · 发表于 2012-6-7 11:56:12

本帖最后由 mayi009 于 2012-6-7 14:58 编辑

测的目标细胞是猪的淋巴细胞，抽血后分离染色。附件的5、6、7都是正常对照组。问题:我检测了10000个细胞，为什么显示在图上的细胞这么少，例如图5，Q3应该有6千多个细胞，可显示出来的细胞这么少。其余的细胞应该是都在坐标线外面了，曾试过增加电压，但结果还是这样！有哪位老师知道是什么原因？应该怎样调？机子是BD的Canto II。

niwanmao · 发表于 2012-6-7 14:01:07

帖子已经帮你从草稿箱恢复了，不知道你的附件在哪里？

mayi009 · 发表于 2012-6-7 14:53:42

本帖最后由 mayi009 于 2012-6-7 14:57 编辑

附件在这里

niwanmao · 发表于 2012-6-7 17:55:58

有没有试过反设门，就是圈中坐标外的细胞，然后反过来看这些细胞在FSC－SSC图上的位置。

mayi009 · 发表于 2012-6-7 20:18:45

我试着圈了一下，坐标外的细胞都落在P1门内，图5落在Y轴外的细胞有5000多个，落在X轴下面的也有2000多个，不知怎么出现这种情况，增加电压也出不来。平时测的贴壁细胞虽然也会有细胞落在坐标外，但只是小部分。不明白为什么这次测的会有这么多落在坐标外？？

niwanmao · 发表于 2012-6-7 21:41:47

mayi009 发表于 2012-6-7 20:18

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我试着圈了一下，坐标外的细胞都落在P1门内，图5落在Y轴外的细胞有5000多个，落在X轴下面的也有2000多个， ...

淋巴细胞你是第一次测？
用分离液提取的？
能不能把原始数据导出为fcs文件传上来给大家看看？

mayi009 · 发表于 2012-6-8 10:35:10

第一次测淋巴细胞的凋亡，是用分离液分离的！

niwanmao · 发表于 2012-6-8 10:53:48

mayi009 发表于 2012-6-8 10:35

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第一次测淋巴细胞的凋亡，是用分离液分离的！

看了下。
问个问题，你们的机器是哪一年的？平时冲洗的次数多不多？

mayi009 · 发表于 2012-6-8 12:50:54

机器买回来还不到两年，冲洗次数不算太多，不过测这个之前刚做了个long clean！您认为可能是哪方面的原因

niwanmao · 发表于 2012-6-8 12:53:58

mayi009 发表于 2012-6-8 12:50

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机器买回来还不到两年，冲洗次数不算太多，不过测这个之前刚做了个long clean！您认为可能是哪方面的原因 ...

我在平时做的时候，也偶尔发现过这类现象，往往可能跟流动室脏有关。需要多次反冲，或者多做几次大冲洗才能解决。

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[凋亡检测] 双染测凋亡