求教，561nm激光特性和用途

hwl985

求教，561nm激光特性和用途。
我想知道我们常用的各个波长流式激光器的激光特性和用途。
这些资料在网上一般都很难收集到。
我找了很久，还是没有找到。。。
还望各位不吝赐教啊～现在急需561nm的，不过有其他激光器的也谢谢。

niwanmao

对于激光器等硬件的详细参数，我确实记不清，所以每次碰到这类问题，我基本上都是找东找西，呵呵。

这里有一篇关于BD FACSAria III的561nm激光器的介绍，供参考：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=1671

gcz5340

561的laser似乎共聚焦里面用的多一点，配561的流式还是偏少。红色荧光蛋白RFP、Alexa Flour546这些都是用561的laser检测的，有什么激光特性不是很熟。

yoyo13146905

关于561激光，德国美天旎公司生产的叫macsquant  vyb专门设计以561黄色激光为主要激光的流式细胞仪。它的特点流式同时分析5个荧光蛋白，且fitc与pe荧光不重叠。感兴趣的去他们官方网站看看。

niwanmao

yoyo13146905 发表于 2012-09-14 23:37:09

                               
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关于561激光，德国美天旎公司生产的叫macsquant  vyb专门设计以561黄色激光为主要激光的流式细胞仪。它的特

看来流式细胞仪的检测范围需要通过激光器的增加来实现了。感谢@yoyo13146905 提供该激光器的信息。 @hwl985

yoyo13146905

不客气，我还要向各位老师学习

universal627

561nm (Yellow-Green)激光并无大家想象的有什么特性，相对于其他激光比如488nm bule，只是作为激发光波长不同而已。
正是因为这种波长，其更适用于某些激发光谱中峰值接近于这个波长的荧光染料，比如RFP, PE (及其衍生染料，例如PE-CY5， PE-CY7，etc.)。以PE为例，561nm 比488nm更能有效激发该荧光，分比率更好，染色指数更好，而且由于和FITC采用不同激发光源，理论上可以采用两套激发/发射光接收装置，它们之间的补偿问题得到解决。

lyncee

1.高敏感性

PE系列的荧光素（如PE、PE－Texas Red、PE－CF594、PE－Cy5、PE－Cy5.5和PE－Cy7）可以被488nm或561nm激光器激发。但相对于488nm来说，配备561nm激光器的流式细胞仪激发效率更高，产生的荧光信号更亮，检测敏感性更好，阳性细胞和阴性细胞的分离度（染色指数，Stain Index）也更大。
2.低荧光泄露

FITC（或GFP）和PE是流式细胞仪上最常用的两种染料。由于发射光谱重叠（Overlapping Emission Spectra），它们被488nm激发时会产生荧光泄漏（spillover）。在配备561nm激光器的流式细胞仪上，FITC和PE分别被488nm和561nm激光器激发，两个通道相对独立，因此二者间的荧光泄漏明显降低，有利于微弱信号的检测。
3.有利于荧光蛋白的检测

荧光蛋白是检测蛋白表达和转染效率的重要工具。配备561nm激光器的流式细胞仪可用于GFP、mCherry和DsRed等荧光蛋白的检测。561nm具有激发效率高、敏感性好等特点，在检测的荧光强度和染色指数方面明显优于488nm的激光器。
4.实现科研／临床应用的多色分析

使用配备561nm激光器的流式细胞仪可轻松实现多种临床／科研应用的多色分析，如4色、6色和8色的淋巴细胞亚群分析

上海瞬渺光电代理的Qioptiq iFLEX-IRIS系列是低躁稳定紧凑型紫外-可见-近红外光激光器的产品组合，在光斑稳定性、功率稳定性、光束质量上有明显优势，是高质量的光源，适合共聚焦显微镜、DNA测序、流式细胞仪、动态光散射等需求高品质光源的应用。

wmj123456

niwanmao 发表于 2012-7-3 10:30
对于激光器等硬件的详细参数，我确实记不清，所以每次碰到这类问题，我基本上都是找东找西，呵呵。

这里有 ...

倪老师，细胞系表达某个抗原，抗原蛋白偶联的是PE抗体，抗原表达应该不是很强的，同一份样本分别在2台仪器，分别被488和561激发的，488激发的百分比偏低，比561激发的低10-20%，请问是激光器不同导致的吗？

另外，如果是激光器激发效率的不同，如果检测的是强的分群明显的指标，百分比还会有差异吗？

niwanmao

wmj123456 发表于 2024-9-14 19:43
倪老师，细胞系表达某个抗原，抗原蛋白偶联的是PE抗体，抗原表达应该不是很强的，同一份样本分别在2台仪 ...

激光器波长差异是导致检测结果不同的主要原因。561nm 激光更接近 PE 的最佳激发波长，因此能够更有效地激发 PE 荧光素，产生更强的信号。

抗原表达水平弱会放大这种差异，因为弱信号更容易受到激发效率的影响。

对于强表达的抗原，不同波长激光的激发效率差异仍可能导致检测结果有所不同，但差异可能会很小。这是因为强信号可以更容易地区分阳性和阴性群体，减小了阈值设置的影响。