调节性T细胞（Treg）检测的设门步骤

niwanmao · 发表于 2012-7-4 14:49:09

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这里的几幅图来自于protocol：人调节性T细胞的分离与功能检测（http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=1673）

1、在FSC/SSC散点图上选择淋巴细胞，然后淋巴细胞门中选择CD4＋的淋巴细胞。

淋巴细胞门

2、在上述细胞中，选择CD25＋CD127low的细胞，就是Treg。

CD25＋CD127low

3、用foxP3验证一下，完全符合，下图的黄色区域即是上述的CD25＋CD127low的细胞。

用FoxP3表达进行验证

小混战 · 发表于 2018-2-2 10:36:29

奇天发表于 2018-1-26 11:07
固定透膜混合液必须好用，并且透膜时间为18小时，最少得过夜才行，否则就染不好。洗的时候也要用含透膜成分 ...

18个小时？请问老师用的是什么牌子的啊？我买的biolegend的核因子检测试剂盒，说明书是固定液30-60min，然后不用洗，直接加破膜液2ml，350 g离心5分钟，重复3次。加foxp3抗体，用破膜液洗涤一次。

liuxin · 发表于 2012-8-6 15:54:03

怎么看不见啊，睨老师，是我的权限不够吗？

niwanmao · 发表于 2012-8-6 16:08:17

liuxin 发表于 2012-08-06 15:54:03

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怎么看不见啊，睨老师，是我的权限不够吗？

不会啊，会不会是你那边访问速度的问题？我用手机客户端能看得到

tree1004 · 发表于 2012-9-19 10:09:21

Great protocol,great picture.

63735523 · 发表于 2012-9-20 17:26:22

那倪老师，以后测treg，可以直接测CD25+CD127-就可以了吧，方便多了，CD4+CD25+FOXP3+多个抗体啊

niwanmao · 发表于 2012-9-20 22:35:29

63735523 发表于 2012-9-20 17:26

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那倪老师，以后测treg，可以直接测CD25+CD127-就可以了吧，方便多了，CD4+CD25+FOXP3+多个抗体啊 ...

CD4也要的，是CD4＋，CD25＋，CD127low的细胞才是treg，因为这些标记都是表面标记，所以做起来比较快。

可可菲 · 发表于 2012-10-3 19:11:21

用CD4CD25FOXP3测的结果总是不理想~

niwanmao · 发表于 2012-10-4 15:25:39

可可菲发表于 2012-10-3 19:11

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用CD4CD25FOXP3测的结果总是不理想~

我最近帮同事做的时候，发现是挺难做的，大部分比例非常低，而且分群不清。

可可菲 · 发表于 2012-10-6 20:38:51

niwanmao 发表于 2012-10-4 15:25

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我最近帮同事做的时候，发现是挺难做的，大部分比例非常低，而且分群不清。 ...

是的但是据说用FOXP3的特定穿膜剂可能会好一些还没试过不知道能不能有些起色~

niwanmao · 发表于 2012-10-6 20:51:07

可可菲发表于 2012-10-6 20:38:51

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是的但是据说用FOXP3的特定穿膜剂可能会好一些还没试过不知道能不能有些起色~

你难道没有用foxp3的破膜剂？那肯定更加做不出来，foxp3是细胞核内的，需要破胞膜和核膜

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[图片] 调节性T细胞（Treg）检测的设门步骤