分选酵母细胞要注意些什么

flow

不知道有人分选过酵母细胞吗，分选的时候有什么要注意的事项吗？

niwanmao

嗯，这东西确实没做过，可以请这个版块的gcz5340版主帮忙回答一下。

我帮你找了点资料，不知道是不是你需要的：
Multiple Classes of Yeast Mutants Are Defective in Vacuole Partitioning yet Target Vacuole Proteins Correctly
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC275988/pdf/mbc00016-0061.pdf

关于酵母分选的注意点，国外有人回答道：
We frequently sort live yeast and developed a FACS screen for mutants defective in vacuole inheritance.  Details of our protocol are described in Wang et al. MBC 7:1375-1389 (1996)（就是上面这篇链接中的文章）. The main complication for sorting yeast is that individuals are much more variable in light scattering measurements, both foward angle light scatter and orthogonal light scatter.  (This is probably due to
1) actual differences in cell size and shape, especially in a mutant population
2) unbudded vs large budded cells and
3) some clumps instead of single cells passing through the detector.)

So when we sort, we general display both fluorescence and foward angle light scatter on a log scale.  

flow

谢谢你，倪老师

niwanmao

flow 发表于 2012-7-18 13:21

                               
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谢谢你，倪老师

不客气。我对分选是门外汉，也希望你到时候摸索出经验来来教我们一些经验。

flow

经验大家分享没问题

olivezhou0716

niwanmao 发表于 2012-7-18 13:03

                               
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嗯，这东西确实没做过，可以请这个版块的gcz5340版主帮忙回答一下。

我帮你找了点资料，不知道是不是你需 ...

提醒一下：千万别把酵母分选和普通的细胞分选用一台流式细胞仪，酵母的生长能力太强了，如果分了酵母估计你的整个流式都别想干别的了。