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[图片] CD3+细胞中HLA-B27表达率

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发表于 2012-7-25 08:15:02 | 显示全部楼层 |阅读模式

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HLA-B27表达

HLA-B27表达

流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2012-9-1 11:42:36 | 显示全部楼层
站长,您好,您这张图是做的正常人对照来检测B27,请问是否每次做B27都需要找个正常人做对照呢(在没有标准微珠或B7情况下)?谢谢~
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 楼主| 发表于 2012-9-1 15:44:47 | 显示全部楼层

哦,这张图是我从实用流式细胞术图谱一书摘录的是,并非是我工作中做出来的。而我们这边只开展白血病免疫分型、白血病残留病灶检测、PNH、干祖细胞分析等项目,所以只能从一些guideline上对你的问题进行回答,希望有相关项目开展的站友可以出来回答一下。 @huzengwu @stef1981 @haven_t

澳大利亚一个协会出的guideline上有这么一段关于质控的话:
6. QUALITY ASSURANCE
6.1. Each laboratory should determine mean channel of fluorescence cut-offs at which HLA-B27 is excluded and demonstrated. The nature of the assay is such that in some samples the mean channel of fluorescence falls within these cut-offs (‘grey area’), these samples would need for further testing. To avoid false positive assignment due to cross-reactivity of monoclonal antibodies, HLA-B27 screening should require the use of two different mAb clones (14-15).
每个实验室都需要确定区分HLA-B27阳性、阴性的平均荧光强度截断值。如果某些标本的平均荧光强度刚好落在该截断值范围内,这些标本需要进一步重新测试。为了防止单克隆抗体交叉反应导致的假阳性,建议使用至少两种不同克隆的单克隆抗体进行HLA-B27筛查。

6.2. The laboratory should belong to and participate in a recognised external quality assurance program as provided by RCPA Quality Assurance (program HLA B27).
实验室需要参加RCPA质控组织的外部质控程序(流式中文网注:这个在我们中国目前似乎还没有,淋巴细胞亚群的质控似乎CDC已经在搞了,不过似乎实施有点难度。)

6.3. The laboratory should determine the level of test variability by preparing and analysing a positive sample at least six times over a period of 48 hrs after venipuncture.

6.4. If possible set up an HLA-B27 positive sample once a week or after post servicing of instrument, especially when setting up this assay. Controls cells frozen from typed donors, stabilised whole blood controls or cell line available from commercial manufacturers may be used. Samples demonstrating HLA-B27 status from the previous day’s run may also be used as control material.
如果可能,至少一周做一次HLA-B27的阳性标本。健康供者的冻存细胞、商业化的外周血质控品或细胞株都可以。前一天做的已经确诊的HLA-B27样本也可以做为质控对照。(流式中文网注:这句话应该是你想要的答案 @清言)

PDF附件见: HLAB27_reviewed_2009.pdf (149.2 KB, 下载次数: 13, 售价: 1 流星) ,下载需要1颗流星(为什么?
使用流式中文网资料阅读器在线阅读,免流星,内容完全一样(使用说明

(如图片无法正常显示请复制链接:http://www.flowcyto.cn/bbs/reader.php?mod=flowreader&file=HaxhliC4HUrBBKUCtUTn436aLX77s1pQQsEEiN1s

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发表于 2012-9-1 21:11:26 | 显示全部楼层
我们是根据阳性Beads来确定阴性的位置,貌似不能用阴性标本,因为有部分患者是弱阳性,这部分超过阴性但没达到Bead荧光强度的标本我们都划到阴性里面。不知道这样子是否正确。
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 楼主| 发表于 2012-9-1 23:11:11 | 显示全部楼层
清言 发表于 2012-9-1 11:42
站长,您好,您这张图是做的正常人对照来检测B27,请问是否每次做B27都需要找个正常人做对照呢(在没有标准 ...

今天整理资料时,发现以前其实发过一个摘自《临床流式细胞分析》书中一个章节的帖子,虽然中文比较容易看的懂,不过里面讲的是与B7分子一起检测,可能还不如上面这段澳大利亚协会的guideline清楚:http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=891
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发表于 2012-9-3 14:40:08 | 显示全部楼层
我们才开始做,是用不加抗体的标本来确定阴性,样本比较少,目前还没做出来阳性
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发表于 2012-9-4 19:41:07 | 显示全部楼层
在没有校准微球的情况下,用同型对照
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 楼主| 发表于 2012-9-4 21:03:38 | 显示全部楼层
huzengwu 发表于 2012-9-4 19:41
在没有校准微球的情况下,用同型对照

多谢@haven_t  @stef1981 @huzengwu 三位资深站友的解答,看来目前大部分都采用微球或同型对照的方式来确定MARKER位置。 @清言 如仍有问题可继续提问。
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发表于 2012-9-14 18:10:52 | 显示全部楼层
0.JPG 1.JPG 2.JPG 3.JPG 4.JPG 5.JPG b.JPG
试剂是BD HLA-B27 kit catalog No 340183。第一张是空白,最后一张是Beads。中间5张是不同病人的结果,前3张是阴性,后两张是阳性。结果的判断是根据BEADS,说明书上有明确说明:Anti-HLA-B27-FITC antibody shows some cross-reactivity with some other HlA types, particularly HLA-B7. 这句话引用了Cytometry B Clin Cytom.2003;54B:28-38 这篇文章的内容。所以我现在都没有做空白对照,直接上Beads。
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 楼主| 发表于 2012-9-14 18:38:56 来自手机 | 显示全部楼层
haven_t 发表于 2012-9-14 18:10:52

试剂是BD HLA-B27 kit catalog No 340183。第一张是空白,最后一张是Beads。中间5张是不同病人的结果,前3张是阴性,后两张是阳性。结果的判断是根据BEADS,说明书

学习了,@清言
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