流式抗体稀释

jingweis530 · 发表于 2012-7-25 17:16:53

请问流式抗体是用去离子水稀释还是用PBS稀释较合适？

niwanmao · 发表于 2012-7-25 17:21:59

强烈不建议稀释。
建议如果要减量，最好就使用减少体积的方式进行。

另外，那些所谓的抗体染色使用的量1：1000，是指抗体量：样本量，而不是把抗体稀释。

jingweis530 · 发表于 2012-7-26 16:31:45

但有些抗体浓度太浓，如 2mg/mL的浓度，体积减少到太小，很难吸到，故需要稀释一下抗体的浓度。

niwanmao · 发表于 2012-7-26 16:52:57

jingweis530 发表于 2012-7-26 16:31

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但有些抗体浓度太浓，如 2mg/mL的浓度，体积减少到太小，很难吸到，故需要稀释一下抗体的浓度。 ...

哦。是自己打出来的抗体吗？

可以试试这个配方：

1%BSA（阻断非特异性结合和稳定作用）
0.1% 明胶 (阻断非特异性结合)
0.05% 叠氮钠 (防腐)
0.01M PBS, pH 7.2-7.4

混合均匀后，保存于4℃。

renping_jsnj · 发表于 2012-7-26 17:14:05

我遇到一支抗体，是0.15ul至100ul细胞中。在具体使用时，是在临用前进行稀释，如100个样，则移出15ul抗体，加stain buffer稀释10倍至150ul。再用排枪每孔加入1.5ul。否则0.15ul完全没有办法进行加样。
这样做，染色结果也挺好的。

niwanmao · 发表于 2012-7-26 17:47:47

renping_jsnj 发表于 2012-07-26 17:14:05

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我遇到一支抗体，是0.15ul至100ul细胞中。在具体使用时，是在临用前进行稀释，如100个样，则移出15ul抗体，

是的，如果临时现配现用的话直接用PBS稀释就可以。

norman204 · 发表于 2012-8-22 12:37:55

学习了
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yoyo13146905 · 发表于 2012-9-10 20:05:45

老师说的好。我试试

universal627 · 发表于 2012-9-11 16:40:48

一般使用FACS buffer稀释，也就是含1－2％FBS的DPBS。

violet870807 · 发表于 2012-10-15 16:30:11

100ul细胞也是用PBS重悬的再加1ul抗体好，还是先把100ulPBS和1ul抗体混匀后再加进离心下来的细胞呢？这叫稀释抗体吗？

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[试剂耗材] 流式抗体稀释