荧光补偿单染对照

yxqd

您好！
比如一个三色实验：CD3-FITC, CD4-PE, CD8-APC
在准备单染补偿对照的时候，CD3-FITC单染管除了要加CD3-FITC抗体之外，是否需要再加CD4-PE同型对照和CD8-APC同型对照？

也就是说，三个单标管是按照这样：
CD3单标管：CD3-FITC抗体、CD4-PE同型、CD8-APC同型
CD4单标管：CD3-FITC同型、CD4-PE抗体、CD8-APC同型
CD8单标管：CD3-FITC同型、CD4-PE同型、CD8-APC抗体

还是按照这样：
CD3单标管：CD3-FITC抗体、
CD4单标管：CD4-PE抗体、
CD8单标管：CD8-APC抗体

niwanmao

FiTC和PE之间需要调节补偿，但是FITC、PE这两个标记与APC之间不需要调节。

因此，只需要设立
CD3 FITC+CD4 同型
CD3同型+CD4 PE

小喵果果

请问同型是否可以直接用不加抗体的细胞代替？

niwanmao

小喵果果 发表于 2012-12-12 19:40

                               
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请问同型是否可以直接用不加抗体的细胞代替？

在多色标记时，如果单纯为了调节补偿，是可以用空白代替同型，但如果仅仅是单标，或者是为了设置MARKER，则建议用同型。空白与同型之间的荧光强度还是有差别的。

seasonwind

老师，样本细胞不变的情况下，单染对照管可以只在第一次流式的提供，以后都用此数据？还是得每次上流式都得准备出单染对照管？

niwanmao

seasonwind 发表于 2013-5-18 15:51

                               
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老师，样本细胞不变的情况下，单染对照管可以只在第一次流式的提供，以后都用此数据？还是得每次上流式都得 ...

单染的主要目的是用于调节补偿，多数情况下是可以的。