请教补偿、电压设定的问题。

FacsAriaIII · 发表于 2012-9-26 13:14:16

首先想问一下，4激光(488, 561, 633, 405) 11色的FacsAriaIII, 理论上是不是可以同时测定11色标记的标本呢？
本贴的主要问题，上传我的fcs文件，1-6是空白和单染对照，10

新建文件夹.rar (2.67 MB, 下载次数: 29) 是标本，小鼠肠道上皮淋巴细胞。我很困惑，当我选择pacific blue和APC或者PE-Cy7作为横纵坐标时，出现的图形很像是补偿不佳的样子。但是看单染标本的图又感觉没什么问题。所以想请教，FITC/PE/APC/PE-Cy7/Pacificblue的五色标本，应该怎样设置电压和补偿？
FSC-A,_SSC-A_subset.png

FacsAriaIII · 发表于 2012-9-26 13:15:45

还有补问一下，大家一般最多一次用几色标一个标本呢？谢谢

niwanmao · 发表于 2012-9-26 20:04:32

这就是多色的烦恼之处。你前面的标本调节得都很到位了，这群细胞我觉得也不能排除是双阳性的细胞群体吧？

我到现在只做到过4色，还没接触到11色。下个月要进来的机器是10色的，我估计也不会全用起来，颜色太多，做起来和分析起来还是挺吃力的。

haven_t · 发表于 2012-9-26 23:06:51

niwanmao 发表于 2012-9-26 20:04

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这就是多色的烦恼之处。你前面的标本调节得都很到位了，这群细胞我觉得也不能排除是双阳性的细胞群体吧？

...

恭喜倪兄，终于有新机器用了，是什么型号的机器啊？

ps：牙龈好点了吗？

niwanmao · 发表于 2012-9-27 12:05:13

haven_t 发表于 2012-9-26 23:06

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恭喜倪兄，终于有新机器用了，是什么型号的机器啊？

ps：牙龈好点了吗？ ...

是canto II 。

PS：牙龈肿是智齿发炎，吃了三天替硝唑，没好，脸都变胖了，呵呵。下午准备去冲一下双氧水。谢谢您的关心！

FacsAriaIII · 发表于 2012-9-27 16:46:12

哦。保重啊，倪老师。
今天有老师建议我换换不同颜色的组合去染同样的标本，如果还是这样，也许是双阳性。不过这种可能性，几乎为零。
明天试试再说。
多谢。

niwanmao · 发表于 2012-9-27 18:29:13

FacsAriaIII 发表于 2012-09-27 16:46:12

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哦。保重啊，倪老师。
今天有老师建议我换换不同颜色的组合去染同样的标本，如果还是这样，也许是双阳性。

谢谢。
期待你的反馈！

FacsAriaIII · 发表于 2012-10-1 17:14:48

反馈：挺失望的，把pacificblue换成了APC-Cy7，结果还是差不多。总之，单染的标本没有问题，待检测的样本显得补偿不对似的。打算发邮件给BD公司，咨询一下。各位有什么好的建议也敬请不吝赐教。多谢啦。

niwanmao · 发表于 2012-10-1 20:12:10

FacsAriaIII 发表于 2012-10-01 17:14:48

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反馈：挺失望的，把pacificblue换成了APC-Cy7，结果还是差不多。总之，单染的标本没有问题，待检测的样本显

为什么双阳性不可能？

FacsAriaIII · 发表于 2012-10-9 13:25:36

pacificblue：CD8; APC: TCR-b;样本是肠道上皮细胞，除了双阴性的那群细胞之外，剩下3群应该是CD4+TCR-b+；CD8+TCR-b+；CD8+TCR-b-；而最后一群差不多就是CD8+TCR-γδ+细胞了，不可能有细胞同时表达TCR-αβ和TCR-γδ。

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[标本处理] 请教补偿、电压设定的问题。