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标题：BD FACSCalibur标准操作规程 流式细胞仪的使用程序
一．开机程序
1． 检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。
2． 打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入 400ml 漂白水原液。打开
压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至 4/5 满（一般可用三蒸水，做分
选必须用 PBS 或 FACSFlow） ，合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所
有管路是否妥善安置。
3． 将 FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是
STANDBY，预热 5－10分钟。排出过滤器内的气泡。
4． 如果需要打印，打开打印机电源。
5． 打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6． 执行仪器PRIME功能一次，以排除 Flow cell中的气泡。
7． 分析样品时，先用 FACAFlow 或 PBS进行 HIGH RUN约 2分钟。
注：做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个 50ml 离心管，
不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。待自动停止后接通浓缩装
置，同上法冲洗一次。
二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files)
1． 从苹果标志中选择CELLQuest 见一个新视窗， 可利用此视窗编辑一个
获取模式文件。
2． 选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点
图） 。从 Dot Plot 对话框中选取 Acquisition 作为图形资料来源，并确
定适当的 x轴和 y轴参数。
3． 选取屏幕左列绘图工具中的Histogram，同上法可绘出 Histogram（直
方图） 。
4． 将此视窗命名后储存于FACStation G3BD Applications CELLQuest
Folder EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。
注：本计算机中已设定两个模式文件：ACQ 和 EXP，储存于 FACStation G3BD
Applications CELLQuest EXP 文件夹中，ACQ 用于细胞 DNA 检测，EXP
用于细胞表面标志分析。
三．用 CELLQuest进行仪器的设定和调整
1． 从苹果画面中选取 CELLQuest，进入 CELLQuest 后在 File 指令栏中
打开合适的获取模式文件。
2． 从屏幕上方Acquire 指令栏中，选取Connect to Cytometer（快捷键：
＋B）进行电脑和仪器的连机。将出现的 Acquisiton Control 对话框
移至合适位置。
3． 从 Cytometer 指令栏中，开启 Detectors/Amps、Threshold、
Compensation、Status 等四个对话框，并将它们移至屏幕右方，以便
获取数据时随时调整获取条件。也可以用 +1，2，3，4 获得此四个
对话框。
4． 在 Detectors/Amps 对话框中，先为每个参数选择适当的倍增模式
(amplifier mode)：线性模式 Lin 或对数模式 Log。一般进行细胞表面
抗原分析如分析外周血的淋巴细胞亚群时， FSC和 SSC 多以线性模式
Lin测量，且DDM Param 选择 FL2，而 FL1, FL2与FL3则以对数模
式 Log 测量；分析细胞 DNA 含量时，FSC，SSC，FL1，FL2，FL3
皆以 Lin 进行测量，且 DDM Param 选择 FL2；分析血小板表型时，
FSC，SSC，FL1，FL2，FL3等均以 Log进行测量。
5． 放上待检测的样品，将流式细胞仪设定于 RUN，流速可在 HIGH 或
LOW 上。
6． 在Acquisiton Control 对话框中，选取Acquire，开始获取细胞。在以
下的仪器调整过程中随时选取Pause，Restart 以观察调整效果。未完
全调整好之前不要去掉SETUP前的“✓” 。
7． 在Detectors/Amps 对话框中， 调整FSC和 SSC探测器中的信号倍增
度：PMT voltages（粗调）与 Amp Gains（细调） ，使样品信号出现在
FSC-SSC点图内,且三群细胞合理分布。
8． 在 Threshold 对话框中选择适当的参数设定 Threshold，并调整
Threshold 的高低，以减少噪音信号（细胞碎片） 。一般做细胞表型时
用 FSC－H 而做 DNA 时用 FL2－H。Threshold 并不影响检测器对信
号的获取，但可改善画面质量。
9． 从屏幕左列绘图工具中选取 Region（区域） ，并在靶细胞周围设定区
域线，即通常所说的门。圈定合适的细胞群可使仪器调整更为容易。
10．在 Detectors/Amps 对话框中，调整荧光检测器（FL1, FL2, FL3, FL4
等）的倍增程度。根据所用的荧光阴性对照样品调整细胞群，使之分
布在正确的区域内。
11．在 Compensation 对话框中，根据所用的调补偿用标准荧光样品调整
双色（或多色）荧光染色所需的荧光补偿。比如应该为 FL1+ FL2- 的
细胞群却分布在 FL1＋ FL2＋区域内， 则需调大 FL2－？％FL1中的
“？” ，并从 FL1-FL2点图中观察新的调整是否恰当
12．在 Status 对话框中可见：Laser Power:正常值—Run/Ready 为
14.7mW，Standby 为 5mW；Laser current:正常值为 6Amps左右。
13．调整好的仪器设定可在Instrument Settings对话框中储存，下次进行
相同实验时可调出使用，届时只需微调即可
注：本计算机中已有三个名叫储存于 FACStation G3 BD Applications
CELLQuest Folder IMM-InstrSettings 及 FACStation G3 BD Files
Instrument Settings Files CalibFile和 Mast-Cell-Set 的参数文件，前二者
可用于分析人白细胞，后者用于分析小鼠肥大细胞。
四．通过预设的获取模式文件进行样品分析
1． 从苹果标志中选择 CELLQUEST，新视窗出现后从 File 指令栏中选择
Open，打开预设的获取模式文件。
2． 从屏幕上方 Acquire 指令栏中，选取Connect to Cytometer进行电脑
和仪器的连机。将出现的 Acquisiton Control对话框移至合适位置。
3． 从 Cytometer 指令栏中选取 Instrument Settings，在其对话框中选择
Open 以调出以前存储的相同实验的仪器设定，按 Set 确定。
4． 在 Acquire 指令栏中，选择 Acquisition&Storage 决定储存的细胞数，
参数，信号道数。其中 Resolution 在做细胞表面标志时选择 256，做
DNA时选择 1024。 Parameter Saved…则根据不同的检测对象选择不
同的参数。
5． 在 Acquire 指令栏中，选择 Parameter Description，以决定文件存储
位置(folder)，文件名称(file)，样品代号以及各种参数的标记(panel)，
即安排 tube1，2，3…的检测参数。一般本仪器获取的数据按照检测
对象的不同分别储存于FACStation G3BD Applications CELLQuest
IMM 和 DNA 文件夹中。文件根据日期命名。
6． 在 Cytometer 指令栏中，选择 Counters，将此对话框移至合适位置，
以便于随时观察 events 计数。
7． 将样品试管放至检测区，在 Acquire Control对话框中选取 Acquire 以
启动样品分析测定。
8． 微调仪器设定，待细胞群分布合适后选择 Acquire Control 对话框中
Pause, Abort, 去除 Setup前的“✓” ，开始正式获取信号，存储数据。
9． 当一定数目的细胞被测定后，获取会自动停止，并会自动存储数据。
重复步骤 7，继续分析下一个样品，直到所有的样品数据分析完毕。
注： 当所有样品分析分析完毕， 即换上三蒸水， 并将流式细胞仪置于 “STANDBY”
状态，以保护激光管。
五．关机程序：
1． 从File中选择Quit, 退出软件，选择 Don’t Save至苹果屏幕。
2． 用4ml 1：10稀释的漂白水作样品，将样品置于旁位（vacuum is on） ，
以外管吸去约2ml，在将样品架置于中位（vacuum is off） ，再 HIGH
RUN 5分钟（内管吸去 2ml） 。
3． 改用三蒸水4ml作样品,同上处理。
4． 按Prime三次。
5． 此时仪器自动转为 STANDBY 状态，换 2ml 三蒸水。必须在仪器处于
“STANDBY”状态 10分钟后再依次关掉计算机、打印机、主机、稳
压电源，以延长激光管寿命，并确保应用软件的正常运行。
6． 填写使用登记表。 | 
发表于 2010-8-1 16:42:20
发表于 2012-5-16 17:45:37
