调节性T细胞分析（foxP3＆CD127）

niwanmao · 发表于 2012-10-25 20:13:34

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CD4＋淋巴细胞至少获取15000－25000个

单个核细胞标本的Treg：

单个核细胞

全血标本的Treg：

yuemin5 · 发表于 2013-4-12 23:17:10

我有一个问题没想明白。
我做过全血，PBMC和淋巴结组织细胞的Treg。发现在CD4的分群上面，全血最清楚：明显分为阴性、弱（单核）和强（Th cells）三群。PBMC 分群次之，最差是淋巴结细胞的分群，有时候基本无法看到分群界限。从CD4的荧光上来看，同样的条件也是外周血中CD4最强。原因可能是什么呢？如何优化？

niwanmao · 发表于 2013-4-12 23:24:46

yuemin5 发表于 2013-4-12 23:17

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我有一个问题没想明白。
我做过全血，PBMC和淋巴结组织细胞的Treg。发现在CD4的分群上面，全血最清楚：明显 ...

淋巴结中的T细胞有些应该是处于immature状态（T细胞的分化规律见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1454-1-1.html），再加上组织处理，可能就造成CD4表达最弱。
而PBMC同样的外周血，表达分群不如直接全血，我认为也是跟FICOLL分离液有关。不知道你怎么看？

yuemin5 · 发表于 2013-4-12 23:34:25

niwanmao 发表于 2013-4-12 23:24

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淋巴结中的T细胞有些应该是处于immature状态（T细胞的分化规律见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-14 ...

个人观点不是因为未成熟的T细胞的原因。做过淋巴结的T亚群，分群很明显。
至于是不是分离液的原因不能肯定。但我感觉和CD4 VS SSC作图方式有关。

yuemin5 · 发表于 2013-4-12 23:38:10

刚发错一张图

1

niwanmao · 发表于 2013-4-13 09:09:23

yuemin5 发表于 2013-4-12 23:34

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个人观点不是因为未成熟的T细胞的原因。做过淋巴结的T亚群，分群很明显。
至于是不是分离液的原因不能肯 ...

可能是我上面用immature这个表述有点问题导致误解，可能改成用naive更好。
我的本意是指：由于淋巴结是人体次级淋巴器官，以B淋巴细胞为主，其中的T淋巴细胞是直接来源于胸腺中的pre T成熟的，然后接受抗原刺激后，释放至外周血。因此，我觉得淋巴结中可能会有小部分naive的T淋巴细胞，而且这些少量naive和淋巴结中大部分的full mature的T细胞在抗原表达强度上跟外周血有轻微差异，应该属于正常情况，并不是说淋巴结中T淋巴细胞不表达CD4、CD8。

刺激造成抗原表达上调的情况很多见，例如淋巴细胞的HLA-DR、粒细胞的CD64等，淋巴结中的T淋巴细胞未经过抗原刺激，一旦接受抗原递呈，就刺激B淋巴细胞增殖，并开始释放至外周血，最后会凭着归巢受体回到淋巴结。基于此，我觉得外周血的CD4等抗原上调可能属于正常现象。

shaniu · 发表于 2013-6-5 10:01:17

niwanmao 发表于 2013-4-13 09:09

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可能是我上面用immature这个表述有点问题导致误解，可能改成用naive更好。
我的本意是指：由于淋巴结是人 ...

倪老师，如果尽可能分选更多的Treg,选取哪个组织为好啊。还好您看看我这幅图圈的门不算大吧

shaniu · 发表于 2013-6-5 10:04:28

这幅图，嘿嘿

niwanmao · 发表于 2013-6-5 10:22:56

shaniu 发表于 2013-6-5 10:04

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这幅图，嘿嘿

可以啊，细胞总数可以再取得多一些。

shaniu · 发表于 2013-6-5 10:47:22

niwanmao 发表于 2013-6-5 10:22

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可以啊，细胞总数可以再取得多一些。

嘿嘿，您真是太及时啦，俺还想问一下如果分选出调节性T细胞做培养，最好分选哪个组织的细胞啊

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[图片] 调节性T细胞分析（foxP3＆CD127）

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