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[图片] 调节性T细胞分析(foxP3&CD127)

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发表于 2012-10-25 20:13:34 | 显示全部楼层 |阅读模式

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CD4+淋巴细胞至少获取15000-25000个

单个核细胞标本的Treg:

单个核细胞

单个核细胞



全血标本的Treg:
2012-10-25_201052.jpg
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2013-4-12 23:17:10 | 显示全部楼层
我有一个问题没想明白。
我做过全血,PBMC和淋巴结组织细胞的Treg。发现在CD4的分群上面,全血最清楚:明显分为阴性、弱(单核)和强(Th cells)三群。PBMC 分群次之,最差是淋巴结细胞的分群,有时候基本无法看到分群界限。从CD4的荧光上来看,同样的条件也是外周血中CD4最强。原因可能是什么呢?如何优化?

全血

全血

PBMC

PBMC

淋巴结组织

淋巴结组织
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 楼主| 发表于 2013-4-12 23:24:46 | 显示全部楼层

淋巴结中的T细胞有些应该是处于immature状态(T细胞的分化规律见:http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1454-1-1.html),再加上组织处理,可能就造成CD4表达最弱。
而PBMC同样的外周血,表达分群不如直接全血,我认为也是跟FICOLL分离液有关。不知道你怎么看?
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2013-4-12 23:34:25 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2013-4-12 23:24
淋巴结中的T细胞有些应该是处于immature状态(T细胞的分化规律见:http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-14 ...

个人观点不是因为未成熟的T细胞的原因。做过淋巴结的T亚群,分群很明显。
至于是不是分离液的原因不能肯定。但我感觉和CD4  VS SSC作图方式有关。

T subsets 1

T subsets 1

T subsets 2

T subsets 2
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发表于 2013-4-12 23:38:10 | 显示全部楼层
刚发错一张图

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 楼主| 发表于 2013-4-13 09:09:23 | 显示全部楼层
yuemin5 发表于 2013-4-12 23:34
个人观点不是因为未成熟的T细胞的原因。做过淋巴结的T亚群,分群很明显。
至于是不是分离液的原因不能肯 ...

可能是我上面用immature这个表述有点问题导致误解,可能改成用naive更好。
我的本意是指:由于淋巴结是人体次级淋巴器官,以B淋巴细胞为主,其中的T淋巴细胞是直接来源于胸腺中的pre T成熟的,然后接受抗原刺激后,释放至外周血。因此,我觉得淋巴结中可能会有小部分naive的T淋巴细胞,而且这些少量naive和淋巴结中大部分的full mature的T细胞在抗原表达强度上跟外周血有轻微差异,应该属于正常情况,并不是说淋巴结中T淋巴细胞不表达CD4、CD8。

刺激造成抗原表达上调的情况很多见,例如淋巴细胞的HLA-DR、粒细胞的CD64等,淋巴结中的T淋巴细胞未经过抗原刺激,一旦接受抗原递呈,就刺激B淋巴细胞增殖,并开始释放至外周血,最后会凭着归巢受体回到淋巴结。基于此,我觉得外周血的CD4等抗原上调可能属于正常现象。
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发表于 2013-6-5 10:01:17 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2013-4-13 09:09
可能是我上面用immature这个表述有点问题导致误解,可能改成用naive更好。
我的本意是指:由于淋巴结是人 ...

倪老师,如果尽可能分选更多的Treg,选取哪个组织为好啊。还好您看看我这幅图圈的门不算大吧
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发表于 2013-6-5 10:04:28 | 显示全部楼层
这幅图,嘿嘿
B5-1_TREG.png
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 楼主| 发表于 2013-6-5 10:22:56 | 显示全部楼层

可以啊,细胞总数可以再取得多一些。
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发表于 2013-6-5 10:47:22 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2013-6-5 10:22
可以啊,细胞总数可以再取得多一些。

嘿嘿,您真是太及时啦,俺还想问一下如果分选出调节性T细胞做培养,最好分选哪个组织的细胞啊
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