CD3/CD4/CD80/CD8a四色检测分析

wmingzhen

倪老师，您好！最近我这儿想做个四色流式分析试验。因为是第一次做四色分析，所以有些问题向您请教。
我的实验是这样的：一种药物，不同的浓度作用于大鼠，然后检测大鼠CD3/CD4/CD80/CD8a表达情况。我的抗体组合是：PE-CD3，FITC-CD4，PercP-CD8a，APC-CD80，这种组合可以吗？需要相应的同型对照吧。获取时需要哪些散点图？获取样本前，还需准备哪些调条件和补偿的？还有其它需要注意的地方吗？
我用的是BDFACSCalibur的流式细胞仪。
在此，先向您表示感谢。

niwanmao

可以采用FMO对照。
1、CD4 FITC/CD8a PerCP，调节FL2-FL1和FL2-FL3、FL4-FL3
2、CD3 PE/CD80 APC,调节FL1-FL2和FL3-FL4
3、最后上四色标本，看看补偿是否合适。

wmingzhen

倪老师，什么是FMO对照？什么时候用FMO对照？什么时候用同型对照？如何判断？
这个实验，获取时需要3个点图：FSC/SSC，CD4 FITC/CD8a PerCP，CD3 PE/CD80 APC吗？对照应该如何设呢？

niwanmao

wmingzhen 发表于 2012-11-28 13:13

                               
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倪老师，什么是FMO对照？什么时候用FMO对照？什么时候用同型对照？如何判断？
这个实验，获取时需要3个点图 ...

FMO对照就是“荧光扣除对照”，参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-534-1-1.html
就是做4色，那么设4管，每管减掉一种荧光（即3种），这是完整版本。
我提的这个方案属于精简版。你可以看自己的需要，选择完整版本或者精简版本。：）

wmingzhen

谢谢，倪老师。