这种HSC的图应该怎么读？

红猫先生

请看附件，用CD34和CD45标记，标本来源是胎盘，主要问题是：1.做出来的图形算不算正常，是不是组织碎片这么多？
2.怎样操作能去除组织碎片，让图形好看些呢？
3.R2怎样框定，怎么取舍，R2那幅图貌似没有很明显的细胞团，那些是不是非特异性结合呢？
有劳各位！！

niwanmao

1、从图形上推测，应该是碎片较多。建议对于这类组织消化或研磨的标本，可以加用7-AAD来进行死细胞和碎片排除。
2、加用7-AAD。
3、造血干细胞如果用ISHAGE方案的话，那么应该至少4个门。可以参考这个帖子中的第1个图：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1918-1-1.html

红猫先生

谢谢站长！7-AAD也有考虑到，但是暂时没有这种试剂，还有没有其他的方法（过滤？数据分析的画门？）去除些碎片？
还有，如果这样的图放在您面前，怎么框定算合理？
有望指教！

niwanmao

红猫先生 发表于 2012-12-7 01:59:45

                               
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谢谢站长！7-AAD也有考虑到，但是暂时没有这种试剂，还有没有其他的方法（过滤？数据分析的画门？）去除些碎片？
还有，如果这样的图放在您面前，怎么框定算合理？
有望指教！

如果只有单纯的细胞碎片是可以通过设门或者提高阈值来排除，但是这个结果中更多的是死细胞或状态不佳的细胞造成的大量非特异性染色，跟正常细胞混杂，所以没法完美排除。

niwanmao

红猫先生 发表于 2012-12-7 01:59

                               
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谢谢站长！7-AAD也有考虑到，但是暂时没有这种试剂，还有没有其他的方法（过滤？数据分析的画门？）去除些 ...

还有个方式，但是不知道是否适合你这种情况，你看看你获取的时候有没有打开FSC-A？如果有，可以试试用FSC-A/FSC-H散点图圈单个细胞，可能能够减少干扰。

红猫先生

好的，回去试试！！请问原理是什么？

niwanmao

红猫先生 发表于 2012-12-10 00:52:39

                               
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好的，回去试试！！请问原理是什么？

主要是圈中单个细胞，以使分析结果更加反映真实情况。原理类似细胞周期分析的fl2a/fl2w