细胞凋亡分析：为什么左上限值高？

wmingzhen

最近接触一个实验：就是乳腺癌细胞与一种鱼细胞的相互作用。就是加入这种鱼细胞后，发现原先贴壁变形的乳腺癌细胞，变成圆形的了。于是想检测乳腺癌细胞凋亡情况，用的是Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒。鱼细胞是按照不同的比例加入的，且作用时间也不同。流式检测发现，左上限的值普遍偏高，是补偿没调好吗？还是其它什么原因？请倪老师帮忙分析一下。谢谢。图如下：

niwanmao

wmingzhen 发表于 2012-12-7 10:46

                               
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这个实验是实验中的突发奇想。没想到，这种鱼细胞对癌细胞真有影响。我们也想到是不是鱼干扰作用的关系，但 ...

有没有测出是什么物质？不同种类细胞混合培养总觉得像是细胞中撒入一把灰尘，肯定会影响细胞株生长的。当然，这只是我个人的臆想。

至于试剂盒，我建议最好用进口的，国产很多生物公司都通过分装贴牌赚钱，可能影响产品质量。

stef1981

补偿没问题，细胞确实死了很多。
有可能细胞长得太密了，已经死了很多。或者消化和吹打过度，造成细胞坏死

niwanmao

我对这个研究非常感兴趣，鱼细胞加进去，如果有意义，难道以后准备用鱼细胞治疗乳腺癌？

至于这几个图，确实PI阳性比例太高了，可能大部分还是死细胞，原因会不会跟鱼细胞这种干扰也有关系？

不过总体感觉这个试剂盒的ANNEXIN V分得也不是很开，不知道是不是他们国内厂商ANNEXIN V分装的浓度太低了还是咋的？

wmingzhen

这个实验是实验中的突发奇想。没想到，这种鱼细胞对癌细胞真有影响。我们也想到是不是鱼干扰作用的关系，但也不确定。这种鱼的确分泌一些物质影响了癌细胞。这种鱼比较特殊，平时单独培养时分裂增殖很慢，但和癌细胞混合后却增殖旺盛。最近我们也想在共聚焦显微镜下长时间观察下它们间的相互作用情况。
试剂盒是国产的。要不等换个进口的试剂盒再试一试吧。

wmingzhen

是什么物质影响的？这是我们的后续试验。若真能检测到这个物质，那真是有很大意义啊。

niwanmao

wmingzhen 发表于 2012-12-8 20:08

                               
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是什么物质影响的？这是我们的后续试验。若真能检测到这个物质，那真是有很大意义啊。
...

我有点担心的是，即使鉴定出了，从不同物种的动物中提取的物质（主要是有机物质），可能也会在实际应用中产生一些排斥反应。不过当然，这些还是需要通过大量实验验证的。预祝你们成功！

wmingzhen

是的，还需要大量试验验证的。
谢谢，倪老师。

niwanmao

wmingzhen 发表于 2012-12-10 20:11

                               
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是的，还需要大量试验验证的。
谢谢，倪老师。

其实你们的思路还是很新颖的，现在的药物除了化学合成，国内很多新药都是从植物中提取的，却很少有从动物体内提取的，如果真的能把有效成份分离出来，并且克服其不同物种之间的排斥性，很有可能真的做到独辟蹊径。

mayi009

这种坏死细胞左移在左上限的情况我也遇到过很多次，这应该和所做的实验和细胞有很大的关系，不一定是试剂盒的问题，昨天我就检测到这种情况，有两个学生过来测，用的是的南京凯基的7-AAD/APC双染试剂盒，两个学生做不同的实验，不同的细胞，但共用一个试剂盒，操作由一个学生完成。检测时，一个学生的图正常，坏死细胞都在右上限，而另一位的结果就和楼主一样。其中原因我想应该是Annexin-v和PS结合不足，但什么原因造成就不得而知了。