细胞内抗原标记

poseidonlyl

最近刚刚开始做流式分选，标记了两个抗原，一个表面抗原，一个胞内抗原，上机检测后发现，表面抗原没有问题，但胞内抗原检测不到信号。胞内的这个抗原表达没有问题，用的是PE标记。固定和破膜用的是BD的Kit，操作也是按照说明书来做的，4℃，反应20min。现在检测不到信号，给怎么解决啊？各位给点意见~~~

niwanmao

poseidonlyl 发表于 2012-12-10 22:17:27

                               
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最近刚刚开始做流式分选，标记了两个抗原，一个表面抗原，一个胞内抗原，上机检测后发现，表面抗原没有问题，但胞内抗原检测不到信号。胞内的这个抗原表达没有问题，用的是PE标记。固定和破膜用的是BD的Kit，

什么胞内抗原？能否透露。

poseidonlyl

niwanmao 发表于 2012-12-10 22:47

                               
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什么胞内抗原？能否透露。

细胞角蛋白~~

niwanmao

没做过这类，但从相关文章上看，keratin这类胞内抗原标记可能是很难清楚地分群的，参见：http://www.biomed.ucf.edu/mtmuller/Protein_J_2012_CK8.pdf  第6页的流式图

而且，用胞内抗原来做流式分选， 请@gcz5340 看看是否合适？

poseidonlyl

niwanmao 发表于 2012-12-11 20:31

                               
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没做过这类，但从相关文章上看，keratin这类胞内抗原标记可能是很难清楚地分群的，参见：http://www.biomed ...

倪老师，我改变了一下细胞固定破膜条件，原来的是4℃，20min，我改成室温（15℃左右），30min。上了流式之后，发现样品和同型对照都有信号，而且这两个几乎没有区别。这是怎么回事啊？是我的破膜条件太强烈了吗？

niwanmao

poseidonlyl 发表于 2012-12-12 13:54:02

                               
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[quote]niwanmao 发表于 2012-12-11 20:31 [url=forum.php?mod=redirect&g

能不能把原始数据传上来？我觉得很可能是破膜后荧光的正常偏移

niwanmao

poseidonlyl 发表于 2012-12-12 13:54:02

                               
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[quote]niwanmao 发表于 2012-12-11 20:31 [url=forum.php?mod=redirect&g

这个条件我觉得问题不大，30分钟更合适