固定的时间和温度对Treg比例的影响

niwanmao · 发表于 2012-12-17 19:40:58

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固定的时间和温度对Treg比例的影响（可见4℃固定较适宜，时间宜控制在30分钟左右，这个条件应该适用于大部分的foxP3固定剂。）
注：O/N意为过夜。
转自BD Webinar幻灯片

刺激的时间和温度对Treg比例的影响

63735523 · 发表于 2013-5-25 17:13:32

这个图怎么这么好看，我做了很多，都分不开群的，用的是BD的试剂盒，说明书里面要求都是常温的，没有要求4度啊，倪老师

niwanmao · 发表于 2013-5-25 21:22:35

63735523 发表于 2013-5-25 17:13

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这个图怎么这么好看，我做了很多，都分不开群的，用的是BD的试剂盒，说明书里面要求都是常温的，没有要求4 ...

常温不是说不可以，但是我们必须要意识到，说明书中所注明的并非说一定就是最佳条件，例如抗体剂量就是一个最明显的道理。
同理，在这个webinar中，研究者对条件进行了比较，其实就是一个优化过程，发现4度更佳。

boiledtea · 发表于 2013-6-26 21:32:27

niwanmao 发表于 2013-5-25 21:22

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常温不是说不可以，但是我们必须要意识到，说明书中所注明的并非说一定就是最佳条件，例如抗体剂量就是一 ...

S/N应该是信噪比吧，23℃最后一个图ND是什么意思呢，是没加FoxP3么？
另外请教倪老师一个问题，破膜后的细胞是4℃保存还是室温保存比较好？有时间限制么？谢谢～～

didi_zhou · 发表于 2013-6-26 21:39:57

boiledtea 发表于 2013-6-26 21:32

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S/N应该是信噪比吧，23℃最后一个图ND是什么意思呢，是没加FoxP3么？
另外请教倪老师一个问题，破膜后的 ...

ND=Not detected

boiledtea · 发表于 2013-6-26 21:42:25

didi_zhou 发表于 2013-6-26 21:39

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ND=Not detected

嗯嗯～也就是所加了，但没检测到么？

niwanmao · 发表于 2013-6-26 22:09:18

boiledtea 发表于 2013-6-26 21:32

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S/N应该是信噪比吧，23℃最后一个图ND是什么意思呢，是没加FoxP3么？
另外请教倪老师一个问题，破膜后的 ...

4℃更好。你看4℃的S/N相对较稳定，即使过夜还是可以检测到。但是30分钟最好。

美猫秀秀 · 发表于 2014-4-28 16:51:29

倪老师，我用EBIOSCIENCE第一次做也是用说明书上的固定破膜半小时，结果细胞全都碎掉了，检测不出来，后来时间改为2分钟，检测treg比例大概是3-4%。请问您知道大鼠的treg比例占CD4+T大概是多少吗？

niwanmao · 发表于 2014-4-28 20:33:17

美猫秀秀发表于 2014-4-28 16:51
倪老师，我用EBIOSCIENCE第一次做也是用说明书上的固定破膜半小时，结果细胞全都碎掉了，检测不出来，后来 ...

我用过ebioscience的foxP3破膜剂做胞内MPO，做不出来，用biolegend的就能做出来，因此，个人感觉ebioscience的破膜效果欠佳。
具体大鼠的Treg比例我也不太了解，应该跟人差不多吧。

葡萄粒 · 发表于 2014-4-28 22:51:28

ebioscience的foxP3破膜剂在4度孵育确实是要比室温效果好一点，还可以用buffer 适当的延长孵育一段时间，然后再去洗涤离心，操作有些类似 biolegend的操作了啊方法都是摸索的。做大鼠的也可以做出来啊，是不是破膜的配置或者方法上有些不一样

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[图片] 固定的时间和温度对Treg比例的影响