建模小鼠胞内细胞因子检测是否需要再体外刺激

leosurely

1、关于疾病建模小鼠Th1、Th2、Th17的检测一直存在这样一个疑问，是否还需要对小鼠脾脏细胞进行体外刺激（PMA+Ionomycin）和阻断（Monensin）？因为在建模的时候，已经给予小鼠相关抗原的刺激，如果再进行体外刺激检测到的细胞因子水平是否能如实代表体内的表达情况？
2、在选择胞内因子抗体时，FITC是否是最佳的荧光选择？（因为在实际检测中，有人反映PE标记的抗体检测的值很低甚至没有，换成FITC就好了，不知这是什么原因？）

niwanmao

如果已经给予足够刺激，有可能不需要再进行体外刺激吧。
至于荧光标记，同一克隆肯定是pe标记更强，至于你说的这种情况，我觉得可能跟抗体厂家、克隆号等不同有关。

dragonhzqsmmu

好像不行吧，我们也是做模型小鼠的脾脏细胞的不同亚群T细胞，不再体外刺激基本上比例很低，另外老外的文献里面好像也是需要分离后再次刺激的，估计是模型小鼠的刺激不够

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2013-1-8 17:38

                               
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好像不行吧，我们也是做模型小鼠的脾脏细胞的不同亚群T细胞，不再体外刺激基本上比例很低，另外老外的文献 ...

查了几篇文献，好像是需要继续体外培养刺激的，谢谢@dragonhzqsmmu 的指正。@leosurely 站友可以继续与 @dragonhzqsmmu 站友继续交流心得：）

leosurely

dragonhzqsmmu 发表于 2013-1-8 17:38

                               
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好像不行吧，我们也是做模型小鼠的脾脏细胞的不同亚群T细胞，不再体外刺激基本上比例很低，另外老外的文献 ...

恩，我们也做了两次不再体外刺激的实验，不管是IL-4还是IL-17表达都很低大概只有0.1~0.2%，所以还是考虑加上体外刺激再试一试。

renping_jsnj

我是这样理解的，要不要体外刺激取决于楼主所建模型。如果模型本身足够引起这些细胞因子的显著变化，那分离之后直接检测应该也可行的，但是体内的细胞因子本身是在持续表达和分泌到细胞外的，再通过体液扩散到其他组织，所以直接检测是很难观察到显著变化的。因此，在体外还需要一个刺激因子生成和阻断因子向胞外释放的过程，这时才能检测到显著变化。图片是我以前的实结果，模型动物和正常动物的细胞在未刺激之前没有显著差异，但体外刺激过后会观察到模型动物的Th17显著升高。

叶绿素

学习了

冰澈澄溪

嗯嗯很好学习了~若是同一批感染的小鼠，在疾病发展的不同阶段杀死后，刺激提取的细胞，那分析出来的细胞因子量也是不一样的。是在不同的阶段产生的MRNA量不同吗？其中的关键因素在哪里？

niwanmao

冰澈澄溪 发表于 2013-10-10 14:12:37

                               
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嗯嗯很好学习了~若是同一批感染的小鼠，在疾病发展的不同阶段杀死后，刺激提取的细胞，那分析出来的细胞因

跟rna无关，跟细胞功能有关。测刺激后产生的细胞因子其实就是测这类细胞的数量。