细胞表面受体检测

CRP · 发表于 2013-1-5 12:29:09

本帖最后由 CRP 于 2013-1-5 12:37 编辑

请教大家，我用流式检测了我研究蛋白的受体检测，是双染，还有一个是染死细胞PI，因为该蛋白也会和死细胞结合，需要排除死细胞，现在从数据上看，结合细胞的百分比是逐渐升高的，趋近100%，现在我想做一个结合曲线，我想请问大家用什么参数合适呢？百分比？MFI（mean or median）？还是别的参数？为什么？

感觉百分比很难排除非特异性结合。

感谢大家帮助！

大家有什么想法都可以讨论一下！

niwanmao · 发表于 2013-1-5 13:27:31

你不是已经用PI排除掉了死细胞吗？再通过FSC/SSC排除掉碎片不就行了。死细胞和碎片排除掉之后，应该非特异性结合很少了。

CRP · 发表于 2013-1-5 13:59:34

niwanmao 发表于 2013-1-5 13:27

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你不是已经用PI排除掉了死细胞吗？再通过FSC/SSC排除掉碎片不就行了。死细胞和碎片排除掉之后，应该非特异 ...

是的，那就是说我直接用百分比可以做结合曲线？

我已经排除死细胞了，但是因为我的变量是加入的蛋白浓度不同，这样不同的蛋白浓度之间是否存在非特异性的结合不一样呢？

niwanmao · 发表于 2013-1-5 14:30:35

CRP 发表于 2013-1-5 13:59

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是的，那就是说我直接用百分比可以做结合曲线？

我已经排除死细胞了，但是因为我的变量是加入的蛋白浓度 ...

浓度不同，非特异性结合的水平可能会不同，但是只要你的细胞状态好、且没有其它干扰因素，一般相差不会很大，特异性结合水平会在某个浓度达到饱和。

CRP · 发表于 2013-1-5 14:46:21

niwanmao 发表于 2013-1-5 14:30

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浓度不同，非特异性结合的水平可能会不同，但是只要你的细胞状态好、且没有其它干扰因素，一般相差不会很 ...

问题就在这里了，如果是按照百分比的话，确实是饱和了，但是如果按照MFI的话，貌似饱和度不好，感觉还是没有被饱和。

所以这样我就不知道选什么参数合适了

niwanmao · 发表于 2013-1-5 14:56:25

CRP 发表于 2013-1-5 14:46

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问题就在这里了，如果是按照百分比的话，确实是饱和了，但是如果按照MFI的话，貌似饱和度不好，感觉还是 ...

你的意思是，随着你加入的蛋白浓度增高，逐渐达到了100％表达率，但是后面再加上去，百分比无法再改变，但是MFI会继续增加？
如果是这样，那么你就用geomean喽。

CRP · 发表于 2013-1-5 15:01:33

niwanmao 发表于 2013-1-5 14:56

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你的意思是，随着你加入的蛋白浓度增高，逐渐达到了100％表达率，但是后面再加上去，百分比无法再改变， ...

是的，确实是这样子，MFI一直增加，但是细胞是无法增加的，这样为何geomean更为合适呢？

CRP · 发表于 2013-1-5 15:05:01

niwanmao 发表于 2013-1-5 14:56

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你的意思是，随着你加入的蛋白浓度增高，逐渐达到了100％表达率，但是后面再加上去，百分比无法再改变， ...

而且几何平均数和MFI处理的差不多，对照比低浓度2个点还高，后面几个浓度点一次升高，而且是越来越高，没有饱和的倾向

niwanmao · 发表于 2013-1-5 15:12:49

CRP 发表于 2013-1-5 15:05

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而且几何平均数和MFI处理的差不多，对照比低浓度2个点还高，后面几个浓度点一次升高，而且是越来越高，没 ...

请参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-799-1-1.html

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