NK细胞的细胞杀伤活性

20071271 · 发表于 2013-1-5 15:24:30

靶细胞CFSE单染管

靶细胞PI单染管

用CFSE染靶细胞，共同培养4h后，加入PI直接上机。
我的鸡NK细胞是原代分离培养的，采用阴性筛选法，因此纯度不高。

问题是这样的，我按照效靶比5:1， 10:1， 20:1 和40:1加入染色的靶细胞，检测发现大概40% 细胞染上了CFSE（从图可以看出），远远多于预期。请各位战友多多指教，大家相互学习。

niwanmao · 发表于 2013-1-5 15:48:02

我觉得你这样圈其实把那些靶细胞也都圈进去了吧，所以在阳性率上肯定包括了靶细胞的比例。为什么不加上CD56等NK细胞的标记来圈NK细胞呢？

20071271 · 发表于 2013-1-5 18:33:54

就是看对靶细胞的杀伤率，所以才圈门比较大，因为靶细胞死伤后，形态会发生变化，尽量把靶细胞都圈上

niwanmao · 发表于 2013-1-5 21:46:55

20071271 发表于 2013-1-5 18:33

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就是看对靶细胞的杀伤率，所以才圈门比较大，因为靶细胞死伤后，形态会发生变化，尽量把靶细胞都圈上 ...

哦，理解错了。
靶细胞的话你尝试一下这样圈（如下图），排除掉碎片试试。另外计算比例应该计算CFSE＋PI＋的细胞比例吧：

改良设门

20071271 · 发表于 2013-1-6 11:10:26

niwanmao 发表于 2013-1-5 21:46

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哦，理解错了。
靶细胞的话你尝试一下这样圈（如下图），排除掉碎片试试。另外计算比例应该计算CFSE＋PI＋ ...

注重看CFSE+ PI+的比例与CFSE+ PI-的比例。
另外，由于靶细胞数量相对NK细胞来说，非常少（20:1），因此，收集的细胞数是不是应该很大，或者直接吸干，对吧？

niwanmao · 发表于 2013-1-6 14:13:18

20071271 发表于 2013-1-6 11:10

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注重看CFSE+ PI+的比例与CFSE+ PI-的比例。
另外，由于靶细胞数量相对NK细胞来说，非常少（20:1），因此， ...

应该就分析CFSE＋PI＋的细胞吧（见下文）。至于靶细胞，稀释的厉害，取的总数肯定要越多，你获取的时候可以设置靶细胞那个门获取1万个。如果你实验中的靶细胞和NK细胞没法通过FSC/SSC区分的话，建议加上NK细胞标记以进行区分。

参见：CFSE标记结合流式细胞术检测NK细胞的分裂和杀伤作用
使用流式中文网资料阅读器在线阅读，免流星，内容与附件完全一样（使用说明）

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◢如确实需要下载附件，请见：

cfse_nk.pdf (1.14 MB, 下载次数: 35, 售价: 1 流星) ，下载需要1颗流星（为什么？）

kobe327292007 · 发表于 2013-5-13 20:05:52

请问你用的CFSE的具体厂家和货号？PM即可，谢谢。

20071271 · 发表于 2013-5-13 20:23:18

kobe327292007 发表于 2013-5-13 20:05

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请问你用的CFSE的具体厂家和货号？PM即可，谢谢。

CFDA-SE 货号 C1157 公司 LIFE

kobe327292007 · 发表于 2013-5-13 20:52:42

20071271 发表于 2013-5-13 20:23

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CFDA-SE 货号 C1157 公司 LIFE

嗯，谢谢。没用过CFSE，过几天可能要做这方面的实验，有问题在论坛发帖，到时候你也来帮忙解决哈。

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[功能检测] NK细胞的细胞杀伤活性