各位CFSE染色都是什么条件呢

20071271 · 发表于 2013-1-6 21:27:02

各位，我做NK细胞的杀伤活性，用CFSE染色靶细胞。
我的条件是：5%FBS重悬细胞，调整细胞浓度至10^5,然后按照加CFSE 5um， 37度5分钟。洗两遍，加PI。直接上机。
各位帮我看看是不是靶细胞都被CFSE杀伤了，还是怎么回事，怎么样才能提高靶细胞的存活啊？我的靶细胞是YAC-1。

niwanmao · 发表于 2013-1-6 22:58:10

从FSC/SSC和CFSE/PI散点图看，应该大部分都死了。
根据这篇文献的染色步骤，染了CFSE之后，应该先进行NK细胞共培养，最后再染PI的啊：http://www.flowcyto.cn/bbs/reade ... PMaZxRDd4Vc5SeHE9Lc

20071271 · 发表于 2013-1-7 08:31:28

我也是显然CFSE，然后共培养，最后染PI。
但是靶细胞没有经过共培养，都死了。
会不会是CFSE的毒性造成的？还是我的细胞状态不好，离心就死了？还是其他

niwanmao · 发表于 2013-1-7 10:42:50

20071271 发表于 2013-01-07 08:31:28

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我也是显然CFSE，然后共培养，最后染PI。
但是靶细胞没有经过共培养，都死了。
会不会是CFSE的毒性造成的

那也有可能，不过在cfse染色前yac-1的活力都好么？

20071271 · 发表于 2013-1-8 15:25:56

niwanmao 发表于 2013-1-7 10:42

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那也有可能，不过在cfse染色前yac-1的活力都好么？

活力看上去还好吧。两三天一传二。我是第一天传，第二天上午用。

niwanmao · 发表于 2013-1-8 21:24:27

20071271 发表于 2013-1-8 15:25

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活力看上去还好吧。两三天一传二。我是第一天传，第二天上午用。

我的意思是在CFSE染色前，有没有用台盼蓝拒染法检测过细胞是死是活？

20071271 · 发表于 2013-1-10 14:31:27

niwanmao 发表于 2013-1-8 21:24

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我的意思是在CFSE染色前，有没有用台盼蓝拒染法检测过细胞是死是活？

用0.4%的台盼蓝，按照1:1的量加入，检测，95%的细胞都是活的，基本没有染色的。

niwanmao · 发表于 2013-1-10 15:49:30

20071271 发表于 2013-01-10 14:31:27

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[quote]niwanmao 发表于 2013-1-8 21:24 [url=forum.php?mod=redirect&got

那么靶细胞的状态应该不成问题，建议做个cfse浓度梯度试试

yuyue1990 · 发表于 2013-11-17 22:05:01

请问你的问题解决了吗？我也用CFSE做杀伤实验，也和你一样的情况，刚开始我也以为是都杀伤了，后来想想觉得不太可能，怀疑CFSE没有染上，于是就只染了靶细胞，在荧光显微镜下观察发现确实都染上了，但是上了流式一看CFSE阳性的细胞特别的少，实在是不知道出了什么问题？你有什么好的建议吗？

月下听蝉 · 发表于 2013-11-18 21:00:18

CFSE毒不死细胞的。带个没加CFSE的对照嘛

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