氯化铵红细胞裂解液的配制

niwanmao

标题：氯化铵红细胞裂解液的配制

氯化铵红细胞裂解液（10×的储存液）

80.2 g NH₄Cl (1.5 M)
8.4 g NaHCO₃ (100 mM)
3.7 g EDTA二钠 (10 mM)

加水至900ml，然后用1N的HCl或1N的NaOH调节pH值至7.4。最后加水至1升。

该10×的储存液可在4℃保存6个月。

工作液的配制：在使用前蒸馏水稀释10倍即可。（1份储存液加上9份水）。工作液用来裂解红细胞。不能以<10×的浓度储存，否则会形成碳酸铵而失效。

gcz5340

我看到的配方好像EDTA二钠盐都是加0.037mg嘛，比如王建中的《临床流式细胞分析》57页就是0.082mM的EDTA-2Na。

niwanmao

gcz5340 发表于 2012-6-5 11:00

                               
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我看到的配方好像EDTA二钠盐都是加0.037mg嘛，比如王建中的《临床流式细胞分析》57页就是0.082mM的EDTA-2Na ...

EDTA的作用估计还是保护的可能性更大，浓度应该问题不大，王建中的书上是1×的还是10×的？

我这个配方是来自于国外一本current protocol in cytometry的附录，而且这么多年用下来，我觉得比商业化裂解液更稳定，细胞形态保持的更好。

niwanmao

gcz5340 发表于 2012-6-5 11:00

                               
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我看到的配方好像EDTA二钠盐都是加0.037mg嘛，比如王建中的《临床流式细胞分析》57页就是0.082mM的EDTA-2Na ...

我已经把那个附录发上来了，参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=1591

gcz5340

这个应该是1×的，如图：

niwanmao

gcz5340 发表于 2012-6-5 12:19

                               
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这个应该是1×的，如图：

了解，红裂是有很多配方，只要找到适合自己的就行了。

象国内我有一次搜索专利时发现山东有家单位申请了一个裂解液的专利，按照不同的配方稀释，可以得到裂解液、破膜剂等不同的效果。

gcz5340

看到那个附录上有一句“some researchers prefer to use a 10-fold lower concentration of EDTA”，看来这个EDTA波动挺大嘛，下次有空的话两个配着比较一下。

niwanmao

gcz5340 发表于 2012-6-5 20:42

                               
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看到那个附录上有一句“some researchers prefer to use a 10-fold lower concentration of EDTA”，看来这 ...

期待你的实验结果

刘星宇

倪老师新年好！今天查了资料才发现NH4Cl 有三种级别：CP、AR、GR，请问您用的是哪个级别的？AR级的500g才几块钱，而GR级的250g要160块，另外AR级的NaHCO3 、EDTA二钠也是几块钱！而BD公司的溶血素100ml（10X）却要2000多块。之前在重庆的时候自己配的红细胞裂解液（不记得NH4Cl 是什么级别）效果很一般，感觉和天跟的红细胞裂解液没有多大差别。是与NH4Cl 的级别有关吗？

niwanmao

所以说裂解液自己配制会便宜很多，而且关键效果好。bd裂解液我也用过很多，一般情况下还过得去，但就像我上个月在流式杂谈版块发帖说的那样，bd裂解液碰到自家的cd19 fitc和cd33 fitc，反而会导致他们的分群不清。

我一般用AR级别的。

化学试剂一般是按杂质含量的多少而分成四个级别：
实验试剂：缩写为LR，又称四级试剂。
化学纯试剂：缩写为CP，又称三级试剂，一般瓶上用深蓝色标签。
分析纯试剂：缩写为AR，又称二级试剂，一般瓶上用红色标签。
保证试剂：缩写为GR，又称一级试剂，一般瓶上用绿色标签（又称优级纯）