关于BD FACSLysing solution的一点看法

niwanmao

这两天，氯化铵接不上用，于是订了瓶BD FACSLysing solution。昨天一开始用，就发现不对，设门图形变得分群不清，有些抗原如CD7、CD19更明显，CD19在粒细胞上表示也呈弱阳性，但当时没考虑到是裂解液的问题，还以为是机器老了，会不会里面又堵了，所以关机前再做了次大冲洗。

今天上午第一轮，图形还是老样子，继续反复冲洗，图形照旧，CD19和CD7都是BD IS的啊，质量不会有问题啊，怎么会突然如此呢，后来才想起来，记得很久以前用的时候图形也是如此，连忙用刚送到的氯化铵粉剂开始配自己的氯化铵裂解液，第二轮用自己配制的氯化铵裂解液，分群非常清楚，抗原表达亦分的很清楚。

我怎么也想不通，为什么BD自家的裂解液与自家的CD19、CD7（两个都的FITC标记的）不兼容呢？当然，其它抗体也一样发生较大改变，只是没CD19和CD7这么明显而已。难道仅仅是因为里面的固定成份？

补充：本想下午传图片，发出这个帖子之后，发现有个关联帖子，原来自己在2012年5月份也发过类似帖子，CD19的对比很明显，大家可以看看：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1466-1-1.html  裂解液还是氯化铵裂解液更靠谱

niwanmao

不同的裂解液对两个正常人的cd5、cd22、cd20表达的影响，见下图

judy006

会不会是裂解时间长了呢？我之前有用过BD HLA-B27 kit里的裂解液，结果外周血的正常分群全乱掉了，圈门都不知道圈在哪里，没办法分析。后来我仔细看了一下说明书，明确写着裂解时间不能超过12mins。回想可能是因为裂解时间没有严格把握造成的。后来重新用自己配的氯化铵做了一下，也是效果很好。自己配的最保险啊~~

niwanmao

judy006 发表于 2013-01-24 09:21:13

                               
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会不会是裂解时间长了呢？我之前有用过BD HLA-B27 kit里的裂解液，结果外周血的正常分群全乱掉了，圈门都不

严格计时10分钟，不含固定成分的裂解液超时过多会影响细胞形态和标本质量，但是像他们这些含固定成分的会好很多。据观察，主要是CD7 fitc 、cd19 fitc、cd5 fitc 、cd45 pe-cy7、cd56 pe，主要表现为分群不清，阴性细胞群显著右移。其它标记影响相对较小。