同型对照阳性很高

CRP · 发表于 2013-1-22 15:20:21

请教大家，我做了一组实验，共四个样品，未刺激对照，未刺激同型对照，刺激样品和刺激同型对照，然后用流式来检测CD64的表达，结果，未刺激组的对照和样品都是阴性的，而刺激组的样品和同型对照都是阳性的（信号很强），现在很奇怪，如果刺激可以上调CD64的表达，为何刺激组的同型对照那么高呢？

另外，我是用间接流式做的，CD64的单抗（555525）和同型对照(555746)是BD的产品。二抗是一个goat源的anti-mouse-IgGF(ab)2-FITC标记的。请问大家：

      1. 我的检测流程有无问题？特别是抗体的选择。

      2. 同型对照也属于IgG，理论上IgG会和CD64结合的，那么这个试剂如何区分这种结合和本身CD64的抗原性结合?

   3. 针对目前的情况，我要怎么办，去消除同型对照的结合?

先谢谢大家了！

刘星宇 · 发表于 2013-1-22 16:29:55

本帖最后由刘星宇于 2013-1-22 16:41 编辑

你这分组都读起来很费劲！四个组？①同型对照--未刺激组；②未刺激组；③同型对照--刺激组；④刺激组

CRP · 发表于 2013-1-22 17:39:29

刘星宇发表于 2013-1-22 16:29

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你这分组都读起来很费劲！四个组？①同型对照--未刺激组；②未刺激组；③同型对照--刺激组；④刺激组 ...

正解
呵呵

niwanmao · 发表于 2013-1-22 21:36:42

为什么不用直标呢？间标影响的因素太多了。
如果有数据，是否可以把数据放上来看看？

CRP · 发表于 2013-1-22 22:26:34

niwanmao 发表于 2013-1-22 21:36

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为什么不用直标呢？间标影响的因素太多了。
如果有数据，是否可以把数据放上来看看？
...

因为这个抗体是既可以做阻断剂使用，又可以用作流式，而且最先是考虑阻断CD64信号的

图的话我没拷，就是个单峰

niwanmao · 发表于 2013-1-22 23:22:40

那么会不会是你的刺激物的影响？

CRP · 发表于 2013-1-23 08:38:17

本帖最后由 CRP 于 2013-1-23 08:39 编辑

niwanmao 发表于 2013-1-22 23:22

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那么会不会是你的刺激物的影响？

可能性不大啊，蛋白刺激是液相的，后面离心早就清除了，更何况还清洗了那么多次

我觉得至少刺激后有某种变化，当然也只是有可能是CD64表达上调，这个CD64也是我研究蛋白的受体，和IgG公用的受体

niwanmao · 发表于 2013-1-23 17:48:49

CRP 发表于 2013-01-23 08:38:17

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你用什么裂解液？bd的？

CRP · 发表于 2013-1-24 15:57:29

niwanmao 发表于 2013-1-23 17:48

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你用什么裂解液？bd的？

这个实验没有使用裂解液，我倒是其他实验有用BD的裂解液。

呵呵

niwanmao · 发表于 2013-1-24 18:06:48

CRP 发表于 2013-01-24 15:57:29

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[quote]niwanmao 发表于 2013-1-23 17:48 [url=forum.php?mod=redirect&go

那么我觉得应该是属于刺激后的正常改变，比如我们在做m3这类白血病时，由于其胞内颗粒较多，故荧光会右移，你说抗体有问题吗？没有，就是因为颗粒影响。另外不同细胞，其阴性阳性分界也还是存在差别。所以我认为你这里的cd64右移现象属于刺激后的一种正常改变，刺激后的表达率还是应该以刺激后的同型对照为测算依据

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