Th1、Th17、Th22

niwanmao · 发表于 2013-2-1 10:49:20

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今天帮研究生检测的，就是采用固定过夜，第二天破膜检测的方式，比以前标记完成过夜检测好很多。

judy006 · 发表于 2013-2-1 22:54:16

倪老师什么样本，怎么CD4没有分群？此外，标记完成过夜检测应该会造成表面分子的脱落，但固定后会好很多。

niwanmao · 发表于 2013-2-2 09:23:23

judy006 发表于 2013-2-1 22:54

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倪老师什么样本，怎么CD4没有分群？此外，标记完成过夜检测应该会造成表面分子的脱落，但固定后会好很多。 ...

原来这位研究生是标记完，12小时后拿过来检测，胞内标记也分群不清而且比例明显降低。所以我建议她固定好之后，第二天破膜做胞内标记。
CD4的分群不清考虑还是跟莫能霉素等刺激剂有关。

alina1123 · 发表于 2013-4-1 21:59:18

倪老师，您指的固定好，是指标记膜抗体之后，用F/P 1ml固定吗？还是多聚甲醛固定第二天再染胞内呢？

gcz5340 · 发表于 2013-4-1 22:16:42

PMA刺激导致CD4下调。IL-17、IL-22确实分的很好了。

niwanmao · 发表于 2013-4-1 22:38:12

alina1123 发表于 2013-04-01 21:59:18

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倪老师，您指的固定好，是指标记膜抗体之后，用F/P 1ml固定吗？还是多聚甲醛固定第二天再染胞内呢？

先多聚甲醛固定，然后第二天做胞内标记。

knifer510 · 发表于 2018-7-27 21:46:13

可以采用先刺激过夜，后破膜固定的方法吗

风吹稻浪 · 发表于 2018-8-22 13:55:17

本帖最后由风吹稻浪于 2018-9-19 12:58 编辑

倪老师@niwanmao ，之前我标完表面抗体后直接破膜标记胞内抗体，但是一直都没有阳性细胞。昨天试了一下先标记完表面抗体之后用4%多聚甲醛固定过夜，今早破膜标记胞内抗体，然后上机还是没检测出Th17阳性细胞，不知道是哪里出了问题？

lukequ · 发表于 2023-7-3 01:14:27

niwanmao 发表于 2013-4-1 22:38
先多聚甲醛固定，然后第二天做胞内标记。

先多聚甲醛固定是指整夜泡着多聚甲醛吗，还是多聚甲醛固定后要洗掉多聚甲醛，然后再过夜。

niwanmao · 发表于 2023-7-3 08:38:24

lukequ 发表于 2023-7-3 01:14
先多聚甲醛固定是指整夜泡着多聚甲醛吗，还是多聚甲醛固定后要洗掉多聚甲醛，然后再过夜。 ...

固定10分钟后，洗涤掉，再PBS重悬，过夜。

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