美天旎的磁珠分选出来的细胞能直接做流式检测吗？

lezhi

又有个问题了，就是用磁珠分选出来的细胞，我要是再做流式检测，抗体还能结合上去吗，比如我用磁珠分选CD4+T细胞，CD4都被磁珠占了，那我想再做流式检测分选出来的细胞是不是CD4+的，那流式抗体还能染上吗？
刚开始想这个实验，很多不明白的，多谢了！

niwanmao

我没做过，但看过他们的说明书，用来分选的抗体上面都有biotin结合的，你分选过后，用anti-biotin FITC或anti-biotin PE标记就可以检测CD4了。请有经验的站友来回答一下。
@olivezhou0716  

gcz5340

只要抗体结合的抗原表位不一样就不影响，买抗体的时候注意一下克隆号。

haven_t

听他们销售说过，他们的磁珠利用空间阻力，仅1/4的CD4分子被磁珠结合，所以分选后可以用流式检测，到底是否如此我也没有证实过。

swjs10197

可以的，美天旎磁珠分选后不影响流式检测：
1、美天旎的微珠直径只有50nm，比细胞小很多很多，不会影响细胞的光散射特性；
    另外，磁珠上没有荧光标记，所以也不会影响流式中荧光的激发。
2、美天旎的磁珠分选中，要通过分选柱将磁场扩大1000倍，因此分选时只需很少的磁珠标记上即可将细胞留在磁场中。其实磁性标记只占用细胞表面抗原的20－30％的结合位点，不影响后面流式抗体再去结合细胞的。

samly0

补充一点，有些磁珠抗体带荧光素的，比如我原来用磁珠分选treg，那个美天旎的试剂盒里，CD25磁珠抗体是带上PE荧光素的，分选完后直接上流式可以检测到CD25，如果还想检测其他marker，比如CD4，只要把分选后的细胞选择其他荧光通道能检测到的其他荧光素标记CD4，就可以了，不会相互影响的

olivezhou0716

大家发言都非常有道理。
考虑检测的话可以根据细胞表达强弱来选择流抗：一般情况下，细胞表达较强，磁珠占据抗原表位的20-50%左右（如2000个分子中占500个）剩下的50%以上的位点还可以结合流抗，这种情况用同一个克隆号的检测抗体就能检测到我们的目标marker的表达；但对于表达水平较弱（CD133，CD25，人CD117等）的marker，磁珠占据大部分位点，同一个克隆号的抗体无法再与同一个表位结合，只能选择不同表位的流抗才能检测到。针对biotin偶联抗体的间标分选，我们也可以选择偶联荧光素的抗生物素抗体检测，如CD25-biotin也可以用biotin-PE/APC检测。对于这种弱表达的情况，建议大家选择抗体最好是PE等强荧光素偶联的。
另外一个就是，做分选前可以先跟美天旎技术支持联系，他们可以会给一些抗体选择的建议。

balabalaone

swjs10197 发表于 2013-3-4 15:23
可以的，美天旎磁珠分选后不影响流式检测：
1、美天旎的微珠直径只有50nm，比细胞小很多很多，不会影响细胞 ...

磁珠没有荧光这个问题我深信不疑，但是过完磁珠做流式染色，我的样本里出现了假阳性，是因为磁珠上的抗体和流式抗体间相互作用导致的吗？（磁珠抗体是大鼠源性，流式抗体是兔源）