Th17和Treg图片分析

63735523 · 发表于 2013-3-14 22:12:18

昨天做了Th17和Treg，分别用CD4+IL-17A、CD4CD25foxp3标记，IL-17A的对照没做，其他都做了，请老师分析下这个图有没有什么问题，可以改进下次。谢谢！

niwanmao · 发表于 2013-3-15 09:58:51

IL17分的挺好的嘛。

foxP3会不会设门不对，同型对照染色时是不是没有做固定破膜处理？

63735523 · 发表于 2013-3-17 14:03:14

老师，Treg是做两管的，一管加CD4、CD25对照、固定破膜后加FOXp3对照，另一管加CD4、CD25、固定破膜后加FOXP3。设门哪里不对呢？

niwanmao · 发表于 2013-3-17 15:06:12

63735523 发表于 2013-3-17 14:03

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老师，Treg是做两管的，一管加CD4、CD25对照、固定破膜后加FOXp3对照，另一管加CD4、CD25、固定破膜后加FOX ...

设门方式可以参考：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2104-1-1.html
一般应该大多数细胞都是foxP3阴性的，而这样设门就变成93％以上的细胞都是foxP3阳性了，这明显不正确，你说是吧？

63735523 · 发表于 2013-3-17 16:06:48

传错了，是这张

63735523 · 发表于 2013-3-17 16:31:32

FOXP3阳性比例很少啊，门如何设好呢？老师。那个网址上的看不明白。

niwanmao · 发表于 2013-3-17 17:19:57

63735523 发表于 2013-3-17 16:31

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FOXP3阳性比例很少啊，门如何设好呢？老师。那个网址上的看不明白。

你这个结果比例是很低，foxP3比较难做。

设门方法就是下图这样：

Treg圈门方式

63735523 · 发表于 2013-3-17 17:50:53

您的意思是不划十字线，而是圈右上角细胞？那不是主观性很强？

niwanmao · 发表于 2013-3-17 18:38:10

63735523 发表于 2013-3-17 17:50

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您的意思是不划十字线，而是圈右上角细胞？那不是主观性很强？

十字门主观性就不强？其实只要是分群清楚，什么问题都没有，分群不清楚，无论是什么门，都存在一定主观性。

63735523 · 发表于 2013-3-17 19:59:56

十字是根据对照来划的，可能准确点吧？
谢谢老师指点！改天我再做几个试试，这几个的确染的不好。

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