流式的阈值的设置

zml · 发表于 2013-3-15 08:34:45

各位老师好，想请教下，在做DNA的时候未染色的细菌在阈值设置在FL3的时候，很难找的，要设置在FS或者SS才能找到。那么我先通过FS的阈值找到了菌，是否可以直接将这个阈值设置在FL3的位置呢？谢谢了

niwanmao · 发表于 2013-3-15 09:48:43

通过fsc的阈值找到了细菌，为何又要去设置fl3的阈值呢？

zml · 发表于 2013-3-15 17:38:26

niwanmao 发表于 2013-3-15 09:48

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通过fsc的阈值找到了细菌，为何又要去设置fl3的阈值呢？

老师请问不是一般测周期的时候阈值都应该设置在FL3通道吗？那我设置在FS对结果不会有影响吗？

niwanmao · 发表于 2013-3-15 18:34:21

zml 发表于 2013-3-15 17:38

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老师请问不是一般测周期的时候阈值都应该设置在FL3通道吗？那我设置在FS对结果不会有影响吗？ ...

阈值设置在FSC对结果不会有影响的，阈值的作用就是把一些不必要的干扰信号排除掉。

zml · 发表于 2013-3-15 18:56:22

niwanmao 发表于 2013-3-15 18:34

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阈值设置在FSC对结果不会有影响的，阈值的作用就是把一些不必要的干扰信号排除掉。
...

但是很奇怪的一点是，我用FS可以找到细菌，但是用FL3是找不到不染色的，后来用染色的样品时候，阈值设置在FL3就可以找到了，请问老师这是什么原因呢？

niwanmao · 发表于 2013-3-15 19:21:01

zml 发表于 2013-3-15 18:56

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但是很奇怪的一点是，我用FS可以找到细菌，但是用FL3是找不到不染色的，后来用染色的样品时候，阈值设置 ...

“FSC可以找到细菌，而FL3找不到不染色的？”这句话我不太明白，你是两个参数的阈值都设了吗？最好有几个图演示一下，否则我还是不太理解你表述的问题

zml · 发表于 2013-3-15 19:28:37

niwanmao 发表于 2013-3-15 19:21

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“FSC可以找到细菌，而FL3找不到不染色的？”这句话我不太明白，你是两个参数的阈值都设了吗？最好有几个 ...

不好意思呀，我没有表达清楚。
我分了两次做的。
在用未染色的样品上样调节各项参数的时候，阈值设置在FS处的时候，FS/SS图上才会显示出细胞群，而若是设置在FL3处，则无法找在FS/SS图上显示出细胞群。
而用PI染色的样品上样时，无论是阈值设置在FL3还是设置在FS处均可以找到。所以很困惑，不清楚产生这种状况的原因。
所以还烦请老师指点，以后上样时，是否我之间就设置在FS就可以了？谢谢老师了。

niwanmao · 发表于 2013-3-15 19:35:34

zml 发表于 2013-3-15 19:28

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不好意思呀，我没有表达清楚。
我分了两次做的。
在用未染色的样品上样调节各项参数的时候，阈值设置在F ...

哦，你FL3的阈值设置多少？
阈值的作用就是用于排除一些不必要的信号，例如你FSC设置5000，那么就代表凡是FSC在5000以下的信号都不会获取到，同样，FL3如果设置100，那么说明FL3荧光强度在100以下的信号都不会获取。基于此原理，你未染色标本的FL3肯定没啥荧光，所以在FL3上肯定显示很弱的，因此如果你把阈值设置为FL3，那么它就可能被排除掉了，就获取不到信号，而经过PI染色的标本，其荧光强度肯定都比较高，因此两种都可以获取掉。

建议你以后还是用FSC。

zml · 发表于 2013-3-15 19:39:29

niwanmao 发表于 2013-3-15 19:35

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哦，你FL3的阈值设置多少？
阈值的作用就是用于排除一些不必要的信号，例如你FSC设置5000，那么就代表凡 ...

我用的是30，那我以后还是用FSC吧，谢谢老师了·

niwanmao · 发表于 2013-3-15 20:02:08

zml 发表于 2013-3-15 19:39

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我用的是30，那我以后还是用FSC吧，谢谢老师了·

因为你存在未染色的标本，所以最好还是用物理参数作为阈值设置指标更好。

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