TdT介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）简介

niwanmao

标题：TdT介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）简介

TdT介导的dUTP缺口末端标记法（TdT mediated-dUTP nick end labeling, TUNEL）是1992年Gavricli等首先报道，它实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法，对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确地反映细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征，可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养细胞和从组织中分离的细胞凋亡测定，并可检测出极少量的凋亡细胞，灵敏度远比一般的组织化学和生物化学测定法要高，因而在细胞凋亡的研究中已被广泛采用。

细胞凋亡时，核酸内切酶活化，双链DNA会出现许多不对称的断裂点，即产生一系列3\'端。外源性荧光标记的脱氧核苷酸末端转移酶（terminal deoxynucleotidyl transferase, TdT）能够催化外源性荧光素或酶标记的dUTP连接到DNA的3\'端，用流式细胞术检测。该方法首先采用蛋白酶K消化法或渗透法对标本细胞进行打孔，然后将标本与TdT和FITC及生物素标记的dUTP一起温育，在温育过程中，TdT将荧光素或生物素标记的dUTP连接到DNA片段的自由3\'端上，采用生物素标记时可在荧光显微镜下直接对荧光素标记的DNA片段进行观察；采用生物素标记时，需以亲和素/生物素－辣根过氧化物酶或亲合素/碱性磷酸酶系统显色后分析。亦可采用偶联于碱性磷酸酶分子的抗荧光素抗体或连接于过氧化物酶分子的抗荧光素抗体作为检测试剂。

近来的研究证实，Br-dUTP比生物素/荧光素标记的脱氧核苷酸磷酸盐复合物、地高辛更容易掺入到凋亡细胞的DNA中，因为Br-dUTP有很强的掺入能力，所以在用荧光素标记的抗BrdU单克隆抗体来检测时，会得到更好的流式细胞信号。未凋亡的细胞因为没有暴露的3\'端，所以不会被检测出。
（摘自实用流式细胞术彩色图谱）

alina1123

请问老师，您做TDT的时候用什么破膜？

niwanmao

alina1123 发表于 2012-6-8 11:34

                               
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请问老师，您做TDT的时候用什么破膜？

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