关于LPS刺激脾脏PBMC后细胞大小变化的问题

david.yanqi · 发表于 2013-4-16 11:27:49

我用LPS刺激小鼠脾脏PBMC 3天后发现在FSC/SSC图上有一群多出来，FSC更大的细胞群，染色显示该群细胞全部为CD19+细胞，请问这群细胞后原来没加刺激的那群细胞有和区别，在分析时应该选用那群细胞？谢谢。

niwanmao · 发表于 2013-4-16 12:50:38

两类细胞都是CD19＋的吗？感觉P1这堆更靠谱。
是否可以把其它的散点图也都放上来看看。

david.yanqi · 发表于 2013-4-16 13:29:56

niwanmao 发表于 2013-4-16 12:50

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两类细胞都是CD19＋的吗？感觉P1这堆更靠谱。
是否可以把其它的散点图也都放上来看看。 ...

谢谢，其他的散点图？指那些呢？另外一群细胞，也就是P2，只有60%是CD19+，因为是全脾脏淋巴细胞，我没有分选，然后P1是接近100%CD19+的细胞，请问老师选那类比较靠谱？或者说这两类有什么区别？再次感谢回答。。

niwanmao · 发表于 2013-4-16 13:39:20

david.yanqi 发表于 2013-4-16 13:29

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谢谢，其他的散点图？指那些呢？另外一群细胞，也就是P2，只有60%是CD19+，因为是全脾脏淋巴细胞，我没有 ...

能将你的原始数据发上来吗？那样分析起来方便些。

david.yanqi · 发表于 2013-4-16 14:38:02

niwanmao 发表于 2013-4-16 13:39

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能将你的原始数据发上来吗？那样分析起来方便些。

恩，谢啦，我是用ACCURI C6做的数据，你看看能不能分析。。

niwanmao · 发表于 2013-4-16 21:02:46

从其它发表的文章来看，LPS刺激之后，FSC上发生分群是正常的事，下面这幅图是我从一篇文章中随便截取的，蓝色的圈是我圈的，左侧圈是细胞碎片，右侧圈就是跟你这个图中类似的FSC增大的细胞，这两类细胞都可以放弃不分析。只需要圈中中间这类细胞。这篇文章分析的是中间这堆SSC偏大的，就是单核细胞，你可以圈中间这堆SSC小的，就是淋巴细胞。

至于你传的ACCURI C6的FCS文件，我用FLOWJO打开SSC显示不出来，所以没法看。估计就是上面所说的那样。

LPS刺激后FSC-SSC示例

david.yanqi · 发表于 2013-4-17 09:31:23

niwanmao 发表于 2013-4-16 21:02

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从其它发表的文章来看，LPS刺激之后，FSC上发生分群是正常的事，下面这幅图是我从一篇文章中随便截取的，蓝 ...

恩，谢谢老师指点，只是这图上最右边那群细胞量很少啊，我刺激3天后右边这群SSC大的一般有17%-25%，并且全部表达CD19，所有我要分析B细胞的话，这群细胞直接忽略应该不合适吧？而且，我只想知道这群细胞是否有什么特殊的标记物，或者是一群特殊分群的B细胞。谢啦，

niwanmao · 发表于 2013-4-17 10:21:10

david.yanqi 发表于 2013-4-17 09:31

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恩，谢谢老师指点，只是这图上最右边那群细胞量很少啊，我刺激3天后右边这群SSC大的一般有17%-25%，并且 ...

你的分析目标是T细胞还是B细胞？

david.yanqi · 发表于 2013-4-17 10:24:05

niwanmao 发表于 2013-4-17 10:21

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你的分析目标是T细胞还是B细胞？

我是分析B细胞，才用LPS刺激，结果发现有一团SSC大的多出来的细胞体，CD19标记显示全是阳性的，所以才很迷茫，想知道这多出来的一团到底是那种B细胞。

niwanmao · 发表于 2013-4-17 10:27:45

david.yanqi 发表于 2013-4-17 10:24

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我是分析B细胞，才用LPS刺激，结果发现有一团SSC大的多出来的细胞体，CD19标记显示全是阳性的，所以才很 ...

我是这么考虑的，由于你是用CD19和CD40双标的，所以B细胞按道理应该两个标记均阳性，但是你所说的那堆比较大的17－25％的细胞只有CD19表达，而没有CD40表达，所以我猜测那堆的细胞应该已经不属于B细胞了吧？你觉得呢？

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