T细胞表面受体表达水平检测的问题

hbezyr

如题。看到文章中有如下图片。我想问的是：
1、听别人讲过MFI。在本例中，感觉是不是首先从PBMC中gate出Vδ2T细胞，再看这种细胞表达isotype,TNFR1,TNFR2三色荧光的强度，用总强度除以Vδ2T细胞个数，得到三种MFI。我这样理解，对吗？
2.本图例中的纵坐标的%MAX是何意，横坐标的点的含义？
3.我自己想检测的是IFNgamma Receptor1和IFNgamma Receptor2在Vδ2T细胞上的表达情况，但是我查到IFNgamma Receptor1和IFNgamma Receptor2只有PE染的，并且这两种受体的isotype来源也是不同。这种情况下，如何设计实验呢？

niwanmao

1、MFI就是平均荧光强度，不需要你自己计算，isotype、TNFR1和TNFR2的MFI只需直接在分析软件中读取即可，不需要再除以细胞个数，有MEAN、GEOMEAN、MEDIAN等可选（相关概念见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2189-1-1.html）

2、％MAX应该是他们重新做图画的，原来的图中应该是number，意义是一样。

3、如果你提到的两种抗体都只有PE的，那么只能分开两管做。isotype也都要分开来做。

hbezyr

谢谢倪老师了！
本图例中的横坐标的是荧光信号强度
纵坐标是细胞数。
你看我的理解对不？
但是感觉图中的三组细胞的数目大致是一样的啊？这个是通过收一样数目的gate内细胞吗？

niwanmao

hbezyr 发表于 2013-4-16 20:55

                               
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谢谢倪老师了！
本图例中的横坐标的是荧光信号强度
纵坐标是细胞数。

他们这篇文章中没有讲述%MAX是什么意思，但我认为就是差不多的意思，你做图完全可以直接用原始的cell number做纵坐标。
一般只要你三组细胞状态差不多，染色前细胞密度调整一致（细胞密度调整一致基本要求），那么结果中设门获得的细胞数也应该是差不多的。