荧光补偿求助

zml

想请各位老师帮忙看下补偿是否调节到位，谢谢了。
我的图和LMD文件在下面这个链接里。


http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... 60&fromuid=8714

niwanmao

你跟@aivy   做的是一样的试剂盒？怎么散点图完全不同呢？
首先因为细菌太小，所以FSC/SSC散点图应该都采用LOG，而不应该用LIN啊。
其次，荧光补偿我觉得没有必要去调吧，象@aivy  做的那样分布其实很标准。

@aivy 来指点一下实验步骤吧

zml

niwanmao 发表于 2013-4-24 20:01

                               
登录/注册后可看大图

你跟@aivy   做的是一样的试剂盒？怎么散点图完全不同呢？
首先因为细菌太小，所以FSC/SSC散点图应该都采用 ...

我也很奇怪为什么不一样。这个我之前检测这个菌一直用LIN，所以用LIN了，如果我不调节补偿出来的图是跟aivy一样的

niwanmao

zml 发表于 2013-4-24 20:04

                               
登录/注册后可看大图

我也很奇怪为什么不一样。这个我之前检测这个菌一直用LIN，所以用LIN了，如果我不调节补偿出来的图是跟ai ...

用LIN能出来？细菌这么小，似乎应该跟我们临床上检测的血小板差不多吧，我们做血小板都得用LOG才能调出来，LIN没法分开。

zml

niwanmao 发表于 2013-4-24 20:10

                               
登录/注册后可看大图

用LIN能出来？细菌这么小，似乎应该跟我们临床上检测的血小板差不多吧，我们做血小板都得用LOG才能调出来 ...

可以，但是会比较集中到偏下的位置，不能调到很上的位置。请问老师，如果不做补偿的话，我直接用染料单标染色，确定阳性所在的位置就可以画门了么？

niwanmao

zml 发表于 2013-4-24 20:19

                               
登录/注册后可看大图

可以，但是会比较集中到偏下的位置，不能调到很上的位置。请问老师，如果不做补偿的话，我直接用染料单标 ...

画门的方法就是按照@aivy  那个帖子中我画的那样，那个设门方法比较公认。

zml

niwanmao 发表于 2013-4-24 20:49

                               
登录/注册后可看大图

画门的方法就是按照@aivy  那个帖子中我画的那样，那个设门方法比较公认。  ...

那请问老师可以这样画门么？ ，是否是只有要明显的两群分出来就可以了呢‘?

niwanmao

zml 发表于 2013-04-24 20:56:47

                               
登录/注册后可看大图

那请问老师可以这样画门么？，是否是只有要明显的两群分出来就可以了呢‘?[attach]

是斜着画，但是还是画不规则门更好，十字门你这个比例计算麻烦。

zml

niwanmao 发表于 2013-4-24 22:39

                               
登录/注册后可看大图

是斜着画，但是还是画不规则门更好，十字门你这个比例计算麻烦。

这样呀·，老师我想请您帮我看下我这样的步骤和一些对应的问题，因为自己是新手，很多都不懂呀，还要麻烦老师。
1)用未染色的样品进行电压和增益调节，使菌再一个较好的位置。但是发现的问题是，用LOG会使菌偏右上，而用LIN则菌会在较左下的位置，不管怎么改变电压增益，都不能集中到中部，这个问题一直困扰我很久。而且用LIN时，我的阈值是用的100，而LOG时用到30时才会有菌出现；
2）第二步，第三步分别是用SYTO 9单染的菌和PI单染的菌上样，调节FL1、FL3的电压使其落在10E1偏右及偏上的位置。我在想这一步是不是其实可以就用未染色的完成呢，用阳性上样这个其实只是起到验证作用呢？
3）这些都完成好了就可以直接上样品了。
  请问老师我这样做是否可行呢？谢谢老师了
      

zml

niwanmao 发表于 2013-4-24 22:39

                               
登录/注册后可看大图

是斜着画，但是还是画不规则门更好，十字门你这个比例计算麻烦。

老师能否帮忙看下我的方法可行么，谢谢了呀