全血Treg图分析

anqun1988

各位老师，我用100ul全血经BD的溶血素溶血后做Treg，但好几次做出来的图是这样，可能是什么原因呢？同样个体的Th17的图就不是这样？我应该选择哪群才是我的淋巴细胞，是下面这一群吗？

niwanmao

感觉你前面几个图的SSC电压是不是调的很大，怎么会这么往上去。

分成两群原因我想可能是多方面的，望大家一起讨论：
1、淋巴细胞由T、B、NK等不同性质的淋巴细胞组成，在裂解后，可能各自对裂解液的反应不同造成物理参数改变。
2、可能BD裂解液中的固定成份造成部分淋巴细胞FSC或SSC减小。
3、淋巴细胞发生粘连？

最后，你试试用FSC(log)/SSC(log)，是否就可以变为一群了？

anqun1988

谢谢老师，老师，我还想问
1.那这两群都是淋巴细胞吗？
2.我想问下FSC(log)/SSC(log)是分析软件里可以设置的吗，还是在获取细胞的时候就设置好？

niwanmao

anqun1988 发表于 2013-5-10 19:38

                               
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谢谢老师，老师，我还想问
1.那这两群都是淋巴细胞吗？
2.我想问下FSC(log)/SSC(log)是分析软件里可以设置 ...

有可能都是淋巴细胞，建议你通过你做的淋巴细胞标记CD4验证一下，可以圈中CD4阳性的细胞，然后反设门看看就知道了。
你用的是FLOWJO吧，这个软件可以在分析的时候将你的FSC/SSC均转换为LOG分析（点击坐标轴旁边的“T”字按钮，选择Use Log Axis就可以了）。

wangkaiyu911

niwanmao 发表于 2013-5-10 19:54
有可能都是淋巴细胞，建议你通过你做的淋巴细胞标记CD4验证一下，可以圈中CD4阳性的细胞，然后反设门看看 ...

倪老师，你好，请问“可以圈中CD4阳性的细胞，然后反设门”，如何操作的，做了许多也都是俩群细胞，谢谢

niwanmao

wangkaiyu911 发表于 2016-12-17 23:06
倪老师，你好，请问“可以圈中CD4阳性的细胞，然后反设门”，如何操作的，做了许多也都是俩群细胞，谢谢 ...

选择CD4高表达的细胞，然后在FSC/SSC散点图，看细胞分布情况。